[发明专利]短短芽孢杆菌菌株发酵液中羟苯乙酯的高效液相色谱检测方法

摘要

本发明提供了一种短短芽孢杆菌菌株发酵液中羟苯乙酯的高效液相色谱检测方法，先配制标准溶液与待测液，然后分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用高效液相色谱仪进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积；之后采用外标法定量分析待测液中羟苯乙酯的含量。本发明填补了现有技术中短短芽孢杆菌菌株发酵液中羟苯乙酯检测方法的空白；另外，该方法还具有灵敏度高、稳定性良好，且样品预处理简单的优点。

主权项

一种短短芽孢杆菌菌株发酵液中羟苯乙酯的高效液相色谱检测方法，其特征在于：该方法具体包括如下步骤：（1）待测液的制备取短短芽孢杆菌菌株FJAT‑0809‑GLX的发酵液5mL，置于50mL具塞离心管中，并加入20mL体积比为70:29.5:0.5乙醇‑水‑冰醋酸的混合液，之后水浴超声波辅助提取15min，接着将提取获得的提取液置于4000r/min下离心10min，离心结束后采用所述混合液将提取液定容至50.0mL，过滤，取25mL滤液上样于已预先用10mL甲醇、10mL蒸馏水活化处理过的固相萃取柱，保持自然流速过柱，用10mL蒸馏水冲洗柱子，抽干，再以3.0mL甲醇洗脱固相萃取柱，控制液体流速不超过1mL/min，收集洗脱液，用甲醇将洗脱液定容至5.0mL，然后经0.22μm细菌过滤器过滤并将所得滤液作为待测液；（2）标准溶液的制备精密称量羟苯乙酯标准品12.5mg并置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀作为对照品贮备液；取所述对照品贮备液2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL分别置于25mL容量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀以获得不同浓度梯度的标准溶液；（3）样品的测定分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用高效液相色谱仪进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积；之后采用外标法定量分析待测液中羟苯乙酯的含量。