[发明专利]用毕赤酵母表达系统高效表达GLP-1人重组蛋白方法无效

专利信息
申请号: 201310157742.0 申请日: 2013-05-02
公开(公告)号: CN103243118A 公开(公告)日: 2013-08-14
发明(设计)人: 韩志强;王凌 申请(专利权)人: 韩志强;王凌
主分类号: C12N15/81 分类号: C12N15/81;C12N1/19;C12N15/16;C07K14/605;C12R1/84
代理公司: 南通市永通专利事务所 32100 代理人: 葛雷
地址: 江苏省南通市*** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明公开了一种用毕赤酵母表达系统高效表达GLP-1人重组蛋白方法,包括载体构建和建立毕赤酵母表达GLP-1菌株。本发明方法简单,易操作,能高效表达GLP-1人重组蛋白,最终产品GLP-1表达蛋白约30mg/ml及99.9%纯度,可以进一步做生化及生物活性试验。
搜索关键词: 用毕赤 酵母 表达 系统 高效 glp 重组 蛋白 方法
【主权项】:
一种用毕赤酵母表达系统高效表达GLP‑1人重组蛋白方法,其特征是:包括载体构建和建立毕赤酵母表达GLP‑1菌株;为构建表达载体,GLP‑1相关基因序列以GLP‑1基因引物用PCR酶连反应法获取,此序列两侧设有Not I和Xho I酶切位点,PCR酶连反应产物用DNA酶Not I和Xho I切割,然后放入pPIC9K载体质粒产生 pPIC9K‑GLP亚克隆;建立毕赤酵母表达GLP‑1菌株pSS,用PCR方法,用杀手毒素分泌信号肽,代替啤酒酵母MATa 蛋白肽前体,从而产生毕赤酵母表达GLP‑1菌株。
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