[发明专利]一种农杆菌介导的水稻幼苗转基因方法

摘要

本发明涉及一种植物转基因方法，特别涉及一种农杆菌介导的水稻幼苗转基因方法。主要步骤包括：（1）试验材料的栽培；（2）农杆菌工程菌转化液的配制；（3）试验材料的预处理；（4）农杆菌浸染；（5）转基因植株的检测。本发明目的在于提供一种在自然环境下的水稻转基因方法，能快速获得转基因植株，进行植物的基因工程改良。该方法可以避免诱导愈伤组织以及愈伤组织培养中引起的不利变异，操作简单，成本低廉，可以在短时间内获得转基因植株。本发明中的方法无需无菌操作，可以简单、快速、高效的获得转基因植株，能在自然条件下规模化进行植物转基因工作，对于水稻基因功能的验证及基因工程育种具有广阔的应用前景。

主权项

一种农杆菌介导的水稻幼苗转基因方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）试验材料的栽培：水稻种子用多菌灵浸泡后，置于适宜的容器中，放入恒温培养箱30℃催芽，当水稻芽生长至0.8~1cm时，开始用作试验受体；（2）农杆菌工程菌转化液的配制：将含有目的基因的农杆菌接种到含有筛选压的液体培养基进行扩大培养，当菌液OD600值达到0.6~1.0时，离心分离菌体，用含有筛选压的AAM液体培养基重悬浮，加入乙酰丁香酮和吐温20，使菌液OD600值为2.0~2.5，农杆菌转化液配制完成，待用；（3）试验受体的预处理：在水稻芽生长至0.8~1cm时，用刀片在离胚约1mm处切断幼苗，用1ml一次性注射器刺伤水稻幼苗的生长点；（4）农杆菌浸染：把（3）预处理好的材料，马上放入到农杆菌转化液中，25~28℃下用农杆菌转化液浸泡10~12小时，浸染结束后，把材料移入到泥中，30～33℃光照培养，当苗有5cm以上时，移入到到大盆中生长，在生长过程中及时除去分蘖，只留主茎；（5）对转基因植株进行转基因鉴定：待水稻苗有4~6叶片时，对其进行GUS组织染色筛选；待水稻苗有6~8叶片时，对其进行Hyg抗性筛选；当水稻剑叶成长至10cm以上时，对其进行PCR检测。