[发明专利]具备双向启动子诱捕及质粒拯救功能的双元Ti质粒及其构建方法

摘要

本发明涉及一种植物及部分真菌T-DNA转化和T-DNA插入突变体库构建所使用的双元Ti质粒载体及其构建方法。首先，在质粒T-DNA区的两端都整合了绿色荧光蛋白报告基因sGFP的启动子捕获模块，并对两端sGFP开放阅读框之前的核酸序列进行了优化调整；其次，质粒拯救的功能模块也通过酶切位点整合到目标质粒中；最后，质粒整合了用于筛选转化子的潮霉素抗性基因，并且该基因及其启动子可以通过Sac I酶切位点进行自由替换，以适应不同的筛选目的和物种。双元Ti质粒载体的选择及其各模块的配置和优化会对转基因的效率、基因克隆及相关基因功能验证的便利性产生很大的影响。通过将多种质粒功能模块有机的整合到一个质粒上，既扩大了质粒的适用范围，又提高了筛选及克隆目标功能基因的效率，为找寻有益基因及其功能验证提供了一个很好的分子工具。

主权项

一种可以用于农杆菌介导的植物或部分真菌T‑DNA转化和T‑DNA插入突变体库构建的Ti质粒载体，即双向启动子诱捕载体1300‑LBsGFP‑HYG‑Cm‑ori‑RBsGFP，其特征在于：在T‑DNA的左边界和右边界附近，均含有绿色荧光蛋白sGFP为报告基因的启动子捕获序列；在该载体的T‑DNA区域包括了用于质粒拯救功能的氯霉素抗性基因序列以及colE1质粒复制子位点；同时，该载体的T‑DNA区域还包括用于转化子筛选的潮霉素抗性基因序列，该抗性基因可以利用酶切位点进行独立更换，且不会影响该质粒上其它位点的序列和功能。