[发明专利]一种小麦基因组中华山新麦草外源物质的鉴定方法

摘要

本发明公开了一种小麦基因组中华山新麦草外源物质的鉴定方法，本发明利用RAPD引物进行华山新麦草特异序列筛选；将特异条带回收、克隆、测序、比对及Southern分析；通过引物设计，进行华山新麦草SCAR标记的转化，并利用小麦近源种属基因组对SCAR标记进行特异性检测；最终用于鉴定小麦-华山新麦草全套异附加系及未确定同源群关系的异附加系中华山新麦草整条染色体。该方法为充分利用华山新麦草种质资源，简化小麦基因组中华山新麦草外源物质的鉴定方法，提高外源种质资源的利用效率提供了可靠保障，本发明所述方法简便易行，适合推广应用。

主权项

一种小麦基因组中华山新麦草外源物质的鉴定方法，包括以下步骤：1)华山新麦草RAPD特异序列筛选及特异片段回收以华山新麦草和各种小麦近缘种属基因组DNA为模板，利用RAPD10碱基随机引物共500条进行PCR扩增，筛选华山新麦草特异多态性条带并回收该条带。2)华山新麦草RAPD特异序列的克隆根据T‑A克隆法，将回收产物连接、克隆到pMD19‑T载体上，转化至DH5α感受态细胞。经蓝白斑筛选，挑取白斑转化子的阳性克隆提取质粒DNA，酶切鉴定，测序。3)序列比对分析将测序结果提交至NCBI GeneBank利用BLASTn和BLASTx进行序列比对。4)Southren blott ing检验序列的特异性为进一步验证华山新麦草特异性序列，以该序列为探针，Ns，ABD，A，AB，AG，AAG，B，C，D，E，H，I，K，M，PPP，B′C′，AtG，R，S，SY，SYW，St，StPY，U，V，W，Y基因组为模板进行Southren blotting分析。5)SCAR引物设计、验证利用primer v5.0和oligo v6.0对华山新麦草特异性序列设计引物，以Ns，ABD，A，AB，AG，AAG，B，C，D，E，H，I，K，M，PPP，B′C′，AtG，R，S，SY，SYW，St，StPY，U，V，W，Y基因组为模板扩增验证SCAR引物的特异性。6)SCAR标记应用利用经验证的SCAR标记，以华山新麦草全套附加系及未确定同源群关系的附加系为模板扩增，检测该特异标记的应用效果。