[发明专利]一种小鼠Rtn4-A/B基因敲除方法有效
| 申请号： | 201310175592.6 | 申请日： | 2013-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN103266102A | 公开（公告）日： | 2013-08-28 |
| 发明（设计）人： | 李强;胥武剑;朱莹 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/63 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种小鼠Rtn4-A/B基因敲除方法，包括：（1）将与小鼠Rtn4-a/b基因同源的5’和3’臂、标记有NEO抗性基因的表达框敲入BAC打靶载体；将得到的Rtn4-A/B-KO质粒DNA用Not I线性化，消化过夜，等体积酚氯仿、氯仿处理，无水乙醇沉淀，用无菌PBS将线性化后的质粒DNA重悬备用；（2）使用线性化后的Rtn4-A/B-KO DNA对ES细胞进行细胞转染；抽提抗性克隆的基因组DNA，进行跨5’臂或3’臂和插入片段的长链PCR鉴定，即可。本发明有效敲除Rtn4-A、B1、B2的基因表达，而对其他Rtn4亚型表达无明显影响，为深入研究Rtn4-A/B的生物学功能奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 小鼠 rtn4 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种小鼠Rtn4‑A/B基因敲除方法，包括：（1）将与小鼠Rtn4‑a/b基因同源的5’和3’臂、标记有NEO抗性基因的表达框敲入BAC打靶载体以替换欲敲除的rtn4‑a/b基因区域；将得到的Rtn4‑A/B‑KO质粒DNA用Not I线性化，消化过夜，等体积酚氯仿、氯仿处理，无水乙醇沉淀，用无菌PBS将线性化后的质粒DNA重悬备用；（2）使用线性化后的Rtn4‑A/B‑KO DNA对ES细胞进行细胞转染，用量为30～50μg；抽提抗性克隆的基因组DNA，进行跨5’臂或3’臂和插入片段的长链PCR鉴定，即可。
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