[发明专利]禽流感H7N9病毒RT-PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及禽流感H7N9病毒RT-PCR检测试剂盒及检测方法。目的是提供的检测试剂盒应具有使用方便、检测准确的特点，提供的方法应具有检测准确性高、检测简单方便的特点。技术方案是：禽流感H7N9病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒，包括脱氧三磷酸核苷、MgCl2、RT-PCR缓冲液、禽流感H7N9病毒基因标准品、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及DNA聚合酶；其特征在于所述检测试剂盒还包括上游引物、下游引物和特异性探针；一种禽流感H7N9病毒荧光定量RT-PCR检测方法，按以下步骤进行：（1）提取待测样品RNA；（2）进行RT-PCR反应；（3）对RT-PCR反应产物进行荧光检测。

主权项

禽流感H7N9病毒荧光定量RT‑PCR检测试剂盒，包括脱氧三磷酸核苷、MgCl2、RT‑PCR缓冲液、禽流感H7N9病毒基因标准品、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及DNA聚合酶；其特征在于所述检测试剂盒还包括上游引物、下游引物和特异性探针，所述上游引物、下游引物和特异性探针的序列如下：上游引物H7‑FP:5’‑CACTGCARAATAGAATACAGATWGAC‑3’；下游引物H7‑RP:5’‑GTGCACYGCATGTTTCCATT‑3’；特异性探针H7‑P:5’‑FAM‑TTATGGTTTAGCTTCGGGGCATCATG‑BHQ1‑3’，其中FAM‑为荧光报告基团，BHQ1为荧光淬灭基团；上游引物N9‑FP:5’‑ACAATACACGATAGRTCCCAGTA‑3’；下游引物N9‑RP:5’‑CTAGTACTTGACCACCCAATGC‑3’；特异性探针N9‑P:5’‑HEX‑CTRTCATCACCRCCCACAGTGTA‑BHQ1‑3’，其中FAM‑为荧光报告基团，BHQ1为荧光淬灭基团；所述禽流感H7N9病毒基因标准品的序列如下：TGCAGAATAGAATACAGATAAACCCAGTGAAGTTGAGTAGTGGATACAAA GACATAATCTTATGGTTTAGCTTCGGGGCATCATGTTTCCTTCTTATAGCCAT TGCAATGGGATTGGTTTTCATTTGCATAAAGAATGGAAACATGCGGTGGTT CTATGCTCTCAGCCAAGGAACAACAATCAGAGGGAAACACTCAAACGGAA CAATACACGATAGGTCCCAGTATCGCGCCCTGATAAGCTGGCCACTATCATC ACCGCCCACAGTGTACAATAGCAGGGTGGAATGCATTGGGTGGTCAAGTA CTAGTTGCCATGATGG。