[发明专利]胃乃安片的质量检测方法

摘要

本发明公开了一种胃乃安片的质量检测方法，所述质量检测方法采用以下鉴别和含量测定项目中的一项或多项：黄芪的薄层鉴别；黄芪、红参和三七的薄层鉴别；人工牛黄的薄层鉴别；胃乃安片的高效液相色谱定性定量鉴别方法；黄芪甲苷的高效液相色谱定量鉴别方法。本发明改进和修订了原有胃乃安胶囊质量标准，增订了黄芪中四种黄酮类成分及黄芪甲苷的薄层鉴别，同时增订了红参的薄层鉴别，并对指标成分黄芪甲苷、人参皂Rg₁、Rb₁及三七皂苷R₁同时进行鉴别;采用HPLC-PDA-ELSD联用技术结合建立其主要活性成分的含量测定及其特征图谱，实现胃乃安片质量的有效控制，并同时具有高效、定量准确、稳定性好、精密度高和重复性佳的优点。

主权项

一种胃乃安片的质量检测方法，其特征在于：所述检测方法采用以下鉴别和含量测定项目中的一项或多项：（1）黄芪的薄层鉴别：a制备供试品溶液：将胃乃安片研细，取1.8‑2.2g，加甲醇48‑52ml，超声处理，过滤，蒸干滤液，残渣加水18‑22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3‑4次，每次28‑32ml，合并上层乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0.8‑1.2ml使溶解，作为供试品溶液；b制备黄芪对照药材溶液：取黄芪对照药材1.8‑2.2g，加甲醇48‑52ml，超声处理，过滤，蒸干滤液，残渣加水18‑22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3‑4次，每次28‑32ml，合并上层乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0.45‑0.55ml使溶解，作为黄芪对照药材溶液；c制备对照品溶液：取芒柄花素对照品、毛蕊异黄酮对照品、芒柄花苷对照品及毛蕊异黄酮苷对照品，分别加甲醇制成每1ml甲醇含0.8‑1.2mg上述对照品的甲醇溶液，作为对照品溶液；d检测：取步骤a所述供试品溶液、步骤b所述黄芪对照药材溶液各9‑10μl和步骤c所述对照品溶液1.8‑2.2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比19‑21︰19‑21︰8‑10的甲苯‑乙酸乙酯‑甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以0.08‑0.12%的1，1‑二苯基‑2‑三硝基苯肼无水乙醇溶液，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；（2）黄芪、红参和三七的薄层鉴别，步骤如下：a制备供试品溶液：将胃乃安片研细，取1.8‑2.2g，加甲醇48‑52ml，超声处理，过滤，蒸干滤液，残渣加水18‑22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3‑4次，每次28‑32ml，合并下层水液，用水饱和正丁醇振摇提取3‑4次，每次28‑32ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2‑3次，每次28‑32ml，弃去氨液，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.45‑0.55ml使溶解，作为供试品溶液；b制备对照药材溶液：取黄芪对照药材1.8‑2.2g，加甲醇48‑52ml，超声处理，过滤，蒸干滤液，残渣加水18‑22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3‑4次，每次28‑32ml，合并下层水液，用水饱和正丁醇振摇提取3‑4次，每次28‑32ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2‑3次，每次28‑32ml，弃去氨液，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.45‑0.55ml使溶解，作为黄芪对照药材溶液；另取红参对照药材0.45‑0.55g与三七对照药材0.65‑0.75g，分别加水90‑110ml，煎煮55‑65min，过滤，滤液用乙酸乙酯提取3‑4次，每次28‑32ml，弃去乙酸乙酯液，再用水饱和正丁醇振摇提取3‑4次，每次28‑32ml，合并正丁醇液，后用氨试液洗涤2‑3次，每次28‑32ml，弃去氨液，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.45‑0.55ml使溶解，分别制得红参对照药材溶液和三七对照药材溶液；c制备对照品混合溶液：取黄芪甲苷对照品、人参皂苷Rg₁对照品、人参皂苷Rb₁对照品及三七皂苷R₁对照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.8‑1.2mg的上述对照品的混合溶液，作为对照品混合溶液；d检测：取步骤a所述供试品溶液与步骤c所述对照品混合溶液各1.8‑2.2μl、步骤b所述黄芪对照药材溶液8‑12μl、红参对照药材溶液5‑7μl和三七对照药材溶液0.8‑1.2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比3.5‑4.5:1:4.5‑5.5的正丁醇‑乙酸乙酯‑稀氨的上层溶液为展开剂，置于浓氨试液预饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以9‑11%硫酸乙醇溶液，在100‑110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；（3）人工牛黄的薄层鉴别：a制备供试品溶液：将胃乃安片研细，取0.18‑0.22g，加甲醇18‑22ml，超声处理，过滤，蒸干滤液，残渣加甲醇0.8‑1.2ml使溶解，作为供试品溶液；b制备对照药材溶液：取人工牛黄对照药材8‑12mg，加甲醇1.5‑2.5ml，超声处理，离心，取上清液作为对照药材溶液；c制备对照品溶液：取胆酸对照品、猪去氧胆酸对照品，分别加甲醇制成每1ml甲醇中含0.8‑1.2mg上述对照品的溶液，作为胆酸对照品溶液和猪去氧胆酸对照品溶液；d检测：取步骤a所述供试品溶液、步骤b所述对照药材溶液和步骤c所述胆酸对照品溶液和猪去氧胆酸对照品溶液各0.8‑1.2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18‑22:23‑27:2.5‑3.5:1.5‑2.5的环己烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑醋酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以9‑11%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；（4）胃乃安片的高效液相色谱定性鉴别，包括如下步骤：a色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，0.1%甲酸为流动相B，梯度洗脱，PDA/ELSD串联检测；所述PDA的检测波长为260nm；ELSD参数为：漂移管温度：60℃，载气流速：35psi，增益值：200；理论板数按毛蕊异黄酮苷峰和人参皂苷Rb₁峰计算均应不低于5000；所述梯度洗脱为：0‑32min，5%→18%乙腈；32‑38min，18%→22%乙腈；38‑58min，22%乙腈；58‑70min，22%→32%乙腈；70‑84min，32%→34%乙腈；84‑96min，34%乙腈；96‑102min，34%→40%乙腈；102‑125min，40%→67%乙腈；b制备参照物溶液：取毛蕊异黄酮苷与人参皂苷Rb₁对照品，分别加甲醇制成浓度为38‑42μg/ml的毛蕊异黄酮苷甲醇溶液和浓度为0.13‑0.17mg/ml的人参皂苷Rb₁甲醇溶液；c制备供试品溶液：将胃乃安片研细，取粉末0.8‑1.2g，加甲醇48‑52ml，超声处理，放至室温后，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，取滤液23‑27ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；d检测：在步骤a所述色谱条件下进行检测；（5）胃乃安片的高效液相色谱定量测定，包括如下步骤：a色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，0.1%甲酸为流动相B，梯度洗脱，用PDA/ELSD串联检测；所述PDA的检测波长为260nm；ELSD参数为：漂移管温度：60℃，载气流速：35psi，增益值：200；理论板数按毛蕊异黄酮苷峰和人参皂苷Rb₁峰计算均应不低于5000；所述梯度洗脱为：0～32min：5%→18%乙腈；32～38min：18%→22%乙腈；38～58min：22%乙腈；58～70min：22%→32%乙腈；70～84min：32%→34%乙腈；84～96min：34%乙腈；96～102min：34%→40%乙腈；102～125min：40%→67%乙腈；b制备混合对照品溶液：取毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁、胆酸与猪去氧胆酸对照品，加甲醇制成每1ml甲醇含毛蕊异黄酮苷38‑42μg、芒柄花苷7‑9μg、毛蕊异黄酮18‑22μg、芒柄花素5‑7μg、三七皂苷R₁0.13‑0.17mg、人参皂苷Rg₁0.28‑0.32mg、人参皂苷Re38‑42μg、人参皂苷Rb₁0.13‑0.17mg、胆酸0.45‑0.55mg、猪去氧胆酸0.35‑0.45mg的混合对照品溶液；c制备供试品溶液：将胃乃安片研细，取粉末0.8‑1.2g，加甲醇48‑52ml，超声处理，放至室温后，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，取滤液23‑27ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；d检测：在步骤a所述的色谱条件下，吸取对照品溶液5μ1、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，其中PDA检测以外标一点法计算，ELSD检测以外标两点法对数方程计算，即得；（6）黄芪甲苷的高效液相色谱定量测定：a色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为30︰70的乙腈‑水为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000；b对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成浓度为0.45‑0.55mg/ml的黄芪甲苷对照品甲醇溶液；c供试品溶液的制备：将胃乃安片研细，取粉末1.3‑1.7g，加甲醇48‑52ml，超声处理，放至室温后，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取滤液23‑27ml，蒸干，残渣加水18‑22ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3‑4次，每次38‑42ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2‑3次，每次38‑42ml，弃去氨液，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；d检测：吸取对照品溶液5μl、15μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。