[发明专利]一种抑癌能力遗传体质评估的基因检测方法及中医体质调理方案

摘要

本发明公开了一种抑癌基因遗传体质评估的基因检测方法及中医体质调理方案，其特征在于，通过同时检测分析个体的TP53BP1基因、TP53基因SNPs位点基因携带型为所有的受检者提供抑癌基因的遗传体质评估、相关疾病风险规避的中医体质调理方案。本发明的优点是可在基因损伤发生前就采取中医体质调理干预措施，从而避免基因损伤，从而降低与基因损伤相关的疾病（如肿瘤）的发病率和死亡率；从分子机理上进行肿瘤发病机理的分析，可用于肿瘤分子流行病学调查和肿瘤防治措施的制定。

主权项

1.一种抑癌基因遗传体质评估的基因检测方法及中医体质调理方案，其特征在于，其方法为：步骤1．检测的样品类型与采样方法：用采样拭在20-30个被测者口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本；步骤2．基因组DNA的抽提方法：采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时－2.5小时，共抽提20－30个被测者样本，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测；步骤3：荧光定量PCR反应将每一个被测者样本分别放入3个反应孔，同时检测抑癌基因TP53（P53BP1）SEQIDNO1：T-885G、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQIDNO2：Gln1136Lys、抑癌基因TP53（TP53）SEQIDNO3：Arg72Pro3个位点，20－30个被测者样本就有60-90个反应孔，并增设不含DNA模版的NTC空白对照孔；每一个反应孔的基因分型根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan-MGB技术，进行检测试剂合成；在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μl，即浓度为20ng/μl的DNA模板2μl、1μl10X荧光定量PCR反应缓冲液ABITaqmanMGB、0.1μl25mMdNTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5μl25mMMgCl₂溶液、0.02μl（5units/μl）TaqDNA聚合酶、去离子水5.43μl、3个位点分别采用不同的正向引物（20μM，0.225μl）、反向引物（20μM，0.225μl）、VIC荧光探针（10μM，0.25μl）和FAM荧光探针（10μM，0.25μl）工具进行检测，将101-151个反应孔在ABI9700型PCR扩增仪上进行反应，先进行预热：50℃、2分钟，95℃、10分钟，然后再进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟、反应结束后取出后再放入ABI7900型荧光定量PCR仪上读取样品荧光量，并自动将20－30个被测者样本检测3个点位的数据对号入座到3个图中，同时生成3张图，是抑癌基因TP53（P53BP1）SEQIDNO1：T-885G图、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQIDNO2：Gln1136Lys图、抑癌基因TP53（TP53）SEQIDNO3：Arg72Pro图；步骤4：SNP基因型分析将ABI7900型荧光定量PCR仪上显示的最终样本荧光信号的3个表和一个NTC空白对照进行比较，每个位点理论上存在三种不同的信号，纯VIC荧光信号、VIC和FAM杂合荧光信号以及纯FAM荧光信号，分别代表该位点三种不同的基因型；(1)、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQIDNO1：T-885G在检测结果图中，共有21-31个点，每个点代表一个被测者样本的检测结果，坐标轴（X：0.4-0.5Y：0.3-0.4）区域为空白对照、坐标轴（X：0.2-0.4Y：1.1-1.3）区域为TT基因型、坐标轴（X：0.6-0.8Y：0.7-1.0）区域为TG基因型、坐标轴（X：0.7-0.9Y：0.3-0.4）区域为GG基因型，其中，TT、TG为风险基因型，携带风险基因型时，蛋白质翻译减少或编码突变型蛋白质时均可导致细胞的恶变，导致癌症易感性增加；（2）、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQIDNO2：Gln1136Lys在检测结果图中，共有21-31个点，每个点代表一个被测者样本的检测结果，坐标轴（X：0.0-0.1Y：0.1-0.3）区域为空白对照、坐标轴（X：0.0-0.1Y：1.1-1.3）区域为AA基因型、坐标轴（X：0.2-0.3Y：0.9-1.2）区域为AG基因型、坐标轴（X：0.35-0.45Y：0.4-0.6）区域为CC基因型，其中，AA为风险基因型，携带风险基因型时，蛋白质翻译减少或编码突变型蛋白质时均可导致细胞的恶变，导致癌症易感性增加；（3）、抑癌基因TP53（TP53）SEQIDNO3：Arg72Pro在检测结果图中，共有21-31个点，每个点代表一个被测者样本的检测结果，坐标轴（X：0.0-0.1Y：0.3-0.4）区域为空白对照、坐标轴（X：0.1-0.3Y：1.6-1.9）区域为CC基因型、坐标轴（X：0.6-0.8Y：1.1-1.4）区域为CG基因型、坐标轴（X：0.9-1.1Y：0.4-0.6）区域为GG基因型，其中，CC为风险基因型，携带风险基因型时，蛋白质翻译减少或编码突变型蛋白质时均可导致细胞的恶变，导致癌症易感性增加；每一个被测者的3个点落在3个表上哪个区域，即可知道被测者抑癌基因的遗传体质；步骤5：根据检测结果给予个性化中医体质调理指导建议，主要有以下几点：1、抑癌基因检测综合评估风险为高风险者，且中医体质分型为淤血质、阳虚质、痰湿质等肿瘤高风险体质，通过中医处方、针灸、按摩等手段改善体质类型，并应用食疗药膳等寓医药于食饵的方法，以扶助正气，激发胃气，促进食欲，提高机体免疫机能，改善全身状况；2、抑癌基因检测综合评估风险为低风险者，但中医体质分型为淤血质、阳虚质、痰湿质等肿瘤高风险体质，通过药膳等手段有针对的调理改善被测者的偏颇体质，扶助正气，改善全身状况，预防肿瘤的发生发展。