[发明专利]哈工大异养硝化不动细菌L7产低温氨单加氧酶的方法及其分离纯化方法有效
| 申请号： | 201310201282.7 | 申请日： | 2013-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN103374555A | 公开（公告）日： | 2013-10-30 |
| 发明（设计）人： | 李伟光;黄晓飞;秦雯;张多英 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12R1/01 |
| 代理公司： | 哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109 | 代理人： | 金永焕 |
| 地址： | 150001 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 哈工大异养硝化不动细菌L7产低温氨单加氧酶的方法及其分离纯化方法，它涉及产酶的方法及其分离纯化方法。产酶：L7菌株接种到产酶液体培养基中培养。分离纯化：一、L7菌株接种到产酶液体培养基中培养，收集菌体；二、将菌体破碎，制备不含溶菌酶的细胞膜；三、对细胞膜进行分离，平衡，洗脱，层析，收集的样品即完成。本发明中产酶液体培养基接种L7菌株的产酶量高，活性稳定，4℃培养70～78h后酶活性最高，产酶量最高。本发明分离纯化方法，所得低温氨单加氧酶是分子量31KDa的单体蛋白，在4～15℃酶活性稳定，当温度超过20℃时，酶失活。在pH值7.5～9酶活性稳定，当pH值为8.0时，酶活性最高。 | ||
| 搜索关键词： | 哈工大 硝化 不动 细菌 l7 低温 氨单加氧酶 方法 及其 分离 纯化 | ||
【主权项】：
哈工大异养硝化不动细菌L7产低温氨单加氧酶的方法，其特征在于它按以下步骤进行：将哈工大异养硝化不动细菌L7(Acinetobacter Heteronitrifihit L7)菌株接种到产酶液体培养基中，接种量为10％，在160rpm/min、4℃培养70～78h，即完成哈工大异养硝化不动细菌L7产低温氨单加氧酶；其中产酶液体培养基的组分如下：NH4Cl0.5g/L、CH3CH2ONa1.0g/L、MgSO4·7H2O0.5g/L、K2HPO40.2g/L、NaCl0.12g/L、0.1g/L CuCl2、血清蛋白0.2g/L、Cty C0.01g/L、维生素C0.01g/L和余量的蒸馏水，pH值7.8～8.2。
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