[发明专利]一种促进三孢布拉氏霉菌中番茄红素合成的方法

摘要

本发明涉及一种促进三孢布拉氏霉菌中番茄红素生物合成的方法。该方法的具体操作步骤如下：（1）在平板上分别培养三孢布拉氏霉菌（Blakeslea trispora）（+）、（-）菌株，得到孢子悬液；（2）将三孢布拉氏霉菌（Blakeslea trispora）（+）、（-）菌株分别接种到装有种子培养基的锥形瓶中；（3）将培养好的1瓶正菌、4瓶负菌种子液混合均匀，接入发酵培养基中发酵；（4）在发酵开始后的24-48小时加入NAD+前体物质继续培养至84小时结束。本发明的方法操作简单、大幅度提高了番茄红素的产量、降低了生产成本，可应用于番茄红素的工业化生产。

主权项

一种促进三孢布拉氏霉菌中番茄红素合成的方法，其特征在于步骤如下：1）平板培养：取去皮土豆20g，加入200ml去离子水煮沸并保持20min；冷却后过滤，取过滤后的清液加2g葡萄糖和2g琼脂；115℃下灭菌30 min，冷却降温后即可制得PDA培养基；取三孢布拉氏霉菌Blakeslea trispora（+）、（‑）菌株孢子悬液分别涂布于PDA平板上，于28℃恒温培养箱中培养3‑5天，4℃保存；2）种子培养：将40g玉米淀粉、20g葡萄糖、50g玉米浆加入到烧杯中，用去离子水定容至1000ml，于95℃下糊化40min；冷却后加入1.5g磷酸二氢钾、 0.1g七水硫酸镁，0.01g维生素B1，混匀后用氢氧化钠溶液调pH至6.5，分装于250ml锥形瓶中，115℃下灭菌30 min；从三孢布拉氏霉菌（Blakeslea trispora）（+）、（‑）菌株平板中用接种环挑取一环的正菌、负菌，分别接种到含有50ml种子培养基的250 ml锥形瓶中，于26‑28℃，180 ‑200rpm条件下避光培养36‑40小时；3）发酵培养：将30g葡萄糖、78g大豆饼粉、1.5g磷酸二氢钾、0.5g七水硫酸镁、1g二丁基羟基甲苯加入到烧杯中，加入去离子水定容至1000ml，配制成发酵液，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，分装于500ml锥形瓶中， 115℃下灭菌30 min；将培养好的三孢布拉氏霉菌Blakeslea trispora（+）、（‑）菌株种子液按照正菌1瓶、负菌4瓶的比例混合均匀，以10%v/v的接种量接入到装有50ml发酵培养基的500ml锥形瓶中，加入烟酸或烟酰胺，于26‑28℃，200‑220rpm条件下避光培养84小时；在发酵开始后36小时加入250µL体积浓度为10%的阻断剂烟碱；发酵84小时后，用去离子水清洗收获的菌体并用纱布过滤，将湿菌体置于真空干燥箱中，45℃、0.08Mpa条件下干燥处理24小时得到干菌体；烟酸或烟酰胺的加入量为0.3‑0.5g/l起始发酵液体积；加入的时间是发酵开始后24‑48小时。