[发明专利]一种黄斑蓝子鱼L-氨基酸氧化酶重组蛋白的制备方法及其用途

摘要

本发明公开了一种黄斑蓝子鱼L-氨基酸氧化酶重组蛋白的制备方法，它采用基因重组技术将黄斑蓝子鱼L-氨基酸氧化酶基因克隆到表达载体上，构建成表达重组质粒，并转化进入大肠杆菌，组建成表达工程菌，经发酵、包涵体蛋白洗涤、复性获得黄斑蓝子鱼L-氨基酸氧化酶重组蛋白，该蛋白对刺激隐核虫具有杀灭作用，可用于后续抗刺激隐核虫制剂的开发。

主权项

一种黄斑蓝子鱼L‑氨基酸氧化酶重组蛋白的制备方法，其特征在于：1‑1.根据黄斑蓝子鱼L‑氨基酸氧酶基因的ORF核苷酸序列和表达载体pET‑32a的核苷酸序列设计引物；1‑2.通过PCR技术获得带有限制性酶切位点和切除信号肽的黄斑蓝子鱼L‑氨基酸氧化酶基因的核苷酸序列；1‑3.将上述获得的黄斑蓝子鱼L‑氨基酸氧化酶基因的核苷酸序列克隆到pMD18‑T载体上，进行DNA序列测定，然后从pMD18‑T载体上切下，克隆到表达载体pET‑32a上，建成表达重组质粒pET‑32a‑LAO，将此构建的黄斑蓝子鱼L‑氨基酸氧化酶重组质粒转入大肠杆菌内，组成工程菌；1‑4.表达工程菌经发酵、发酵液处理、包涵体洗涤和纯化，得到黄斑蓝子鱼L‑氨基酸氧化酶包涵体蛋白；1‑5.将纯化的黄斑蓝子鱼L‑氨基酸氧化酶包涵体蛋白通过体外复性，形成可溶的黄斑蓝子鱼L‑氨基酸氧化酶重组蛋白。