[发明专利]一种快捷构建amiRNA干扰载体的方法无效
| 申请号： | 201310205161.X | 申请日： | 2013-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN103255158A | 公开（公告）日： | 2013-08-21 |
| 发明（设计）人： | 李阳;李阳生;卢楠;李杨 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/63 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 薛玲 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种构建人工小RNA(amiRNA)表达载体的方法，其通过人工合成含有正向靶标-环部骨架-反向靶标的DNA，且此DNA片段两端含有预设的typeIIS内切酶酶切位点，将其克隆到含有此typeIIS限制性内切酶的含有amiRNA前体骨架的载体中得到小RNA(amiRNA)表达载体。该方法具有高效率、高通量的优点，而且操作简单，用此方法构建一个干扰载体只需要设计一对50bp左右的引物，1-2小时即可完成构建。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快捷 构建 amirna 干扰 载体 方法 | ||
【主权项】：
一种构建miRNA干扰载体的方法，该方法采用了含有amiRNA前体骨架的载体以及含有正向靶标‑环部骨架‑反向靶标的DNA片段，所述载体上的两侧翼序列之间有一对相同但方向相反的typeIIs型内切酶酶切序列，所述DNA片段两端含有预设的typeIIS内切酶酶切序列，并且载体上酶切产生的粘末端和合成的DNA上酶切产生的粘末端可以完全互补，通过此typeIIS酶切并连接酶切产物，即可完成载体构建。
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