[发明专利]羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子多克隆抗体的获取方法无效

专利信息
申请号: 201310207609.1 申请日: 2013-05-30
公开(公告)号: CN103265632A 公开(公告)日: 2013-08-28
发明(设计)人: 罗卫星;陈志;刘若余;蔡惠芬;张依裕;宋桃伟;刘彬 申请(专利权)人: 贵州大学
主分类号: C07K16/18 分类号: C07K16/18;C07K16/06;C07K14/47;C12N15/70;C12N15/12
代理公司: 贵阳中新专利商标事务所 52100 代理人: 李亮;程新敏
地址: 550025 贵州省贵*** 国省代码: 贵州;52
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摘要: 发明公开了一种羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子的多克隆抗体的获取方法,利用特异性引物将羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子基因进行PCR扩增,获得它的CDS序列;并通过酶切位点引物来构建原核表达载体,获得原核表达载体pET32a-RERG;再将原核表达载体pET32a-RERG进行目的基因的诱导表达,获得羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子蛋白;将ras相关的、雌激素调节的生长抑制子蛋白纯化至85%以上;将纯化后的羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子蛋白免疫到动物上,在最后一次免疫的一周后采全血并分离血清;将血清纯化后,获得目的羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子的多克隆抗体。
搜索关键词: ras 相关 雌激素 调节 生长 抑制 克隆 抗体 获取 方法
【主权项】:
一种羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子的多克隆抗体的获取方法,其特征在于:利用设计的特异性引物将羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子基因进行PCR扩增,获得它的CDS序列;并通过特异性引物来酶切,并构建原核表达载体,获得原核表达载体pET32a‑ RERG;再将原核表达载体pET32a‑ RERG进行目的基因的诱导表达,获得羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子蛋白;将羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子蛋白纯化至85%以上;将纯化后的羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子蛋白免疫到动物上,在最后一次免疫的一周后采全血并分离血清;将血清纯化后,获得目的羊ras相关的、雌激素调节的生长抑制子的多克隆抗体; 特异性引物包括上游引物:5 ' ATTGTCTACCAGCACCCAGCAT ‑3及下游引物:5'‑ TCAGCAGTTAGGCAACTTCG‑ 3’;酶切位点引物包括上游引物:5'‑ GCGGATCCATGGCTAAAAGTGCAGAGGTC‑3' ,该引物序列的下划线为BamHⅠ位点;下游引物:5'‑CGCTCGAGGTGGTGGTGGTGGTGGTGACTGCTGATTTTGGTGAGCAT‑3' ,该引物序列的下划线为XhoI位点。
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