[发明专利]一种利用组织培养技术快速繁殖暗紫贝母的方法

摘要

本发明公开了一种利用组织培养技术快速繁殖暗紫贝母的方法，包括材料的选择与消毒、材料的处理、初代培养、继代培养、生根培养、生根试管苗温室炼苗移栽等步骤，本发明采用新鲜的暗紫贝母鳞茎球作为外植体进行繁殖，鳞茎球的利用率很高，达到95%以上，并且培育出来的植株枝叶茂盛，根系发达，植株生长旺盛；一个直径4cm鳞茎球大约能够繁殖150-200个小鳞茎，即能够利用有限的资源进行繁殖，繁殖系数很高。在继代培养过程中当愈伤组织分化出细芽后，升高培养温度，提高光照周期和光照强度，这样缩短了培养时间。

主权项

一种利用组织培养技术快速繁殖暗紫贝母的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）材料的选择与消毒：首先选用生长健壮、成熟的新鲜的暗紫贝母鳞茎球，剥去鳞茎最外层干皱的鳞片和基部残余老根，流水冲洗30 min后放入清水中浸泡15min，用50％多菌灵500倍液浸泡20‑30 min后，将鳞茎球一层一层的剥开，再在紫外灯下照射20 min，继而转入超净工作台，在超净工作台上先用70‑75 %的乙醇浸泡10秒，然后用无菌水冲洗，再转入滴加了2～3滴土温80的0.1 %的升汞溶液中浸泡5min，用无菌水冲洗4次； （2）材料的处理：将消毒处理好的鳞片用无菌滤纸吸干，在无菌条件下将材料按照上、中、下部还有基部分割开来，分别切成4‑6mm的小块；（3）初代培养：在无菌的条件下将步骤（2）得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在在MS常规培养基中添加了1.0mg/L的6‑BA、1.2mg/L的NAA、 0.4mg/L的ZT；培养温度为26℃，光照时间14 h/d，光照强度22 00 Lx，PH为 6.5，琼脂5 g/L，经过15‑20天形成愈伤组织；（4）继代培养：将初代培养的愈伤组织切下接种在继代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6‑BA、0.4 mg/L的NAA、0.3mg/L的KT和30mg/L的蔗糖，培养温度为22℃，光照周期13h/d，光强度为2500lux，PH 6.5，经过4‑5天时间分化出细芽后，升高培养温度到25℃，光照周期为14h/d，光强度为2800lux，继续培养6‑10天便可分化出一簇一簇的小鳞茎；（5）生根培养：将分化出来的小鳞茎一个个分别接种于下列诱导培养基中进行生根诱导： MS培养基+1.5mg/L的活性炭+6g/L的琼脂+0.3mg/L 的IBA+0.4mg/L的KT，培养温度为23℃，光照周期12h/d，光强度为2000lux，PH值为6.0，经过20‑25天待小鳞茎长至3cm高，当根系比较健壮并且长出6‑10个根时，即开始下一个阶段；（6）生根试管苗温室炼苗移栽：将生根的试管苗开瓶后置温室温度在25‑28℃，湿度80‑85％，光照强度在5000‑5500lx条件下炼苗3‑5天后，洗掉苗上的培养基，将其移栽到由羊粪、腐殖土、珍珠岩的混合比例为1∶3∶2 的苗床上，当外界夜间温度在10‑15℃，白天温度在18‑25之间时把试管苗进行移栽，在移栽初期的5天内，用塑料薄膜覆盖，以保持湿度在80%以上，并且控制光照强度在2700‑3300lx，之后逐渐揭去薄膜并适当增加光照，直至将移栽苗置于自然条件下。