[发明专利]一种利用组织培养技术快速繁殖伊犁贝母的方法

摘要

本发明公开了一种利用组织培养技术快速繁殖伊犁贝母的方法，主要通过对外植体的选择与消毒处理、材料处理、愈伤组织的诱导、继代培养、生根培养以及炼苗移栽等步骤，使伊犁贝母的愈伤组织形成率达到了93%，增殖倍数达到了6倍，生根率达到了92%，最终的成活率达到了90%，并且伊犁贝母的质量和产量都得到很大的提高。并且本发明模拟野生伊犁贝母的生长环境，培养过程中温度较低，培养基质以黑钙土为主，在这种模拟野生环境中生长，质量和品质得到了提高。

主权项

一种利用组织培养技术快速繁殖伊犁贝母的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）外植体的选择与消毒处理：首先选用生长健壮、成熟的新鲜的伊犁贝母鳞茎球，剥去鳞茎最外层干皱的鳞片和基部残余老根，流水冲洗30 min后放入清水中浸泡15min后，将鳞茎球一层一层的剥开，再在紫外灯下照射20 min，继而转入超净工作台，在超净工作台上先用70‑75%的乙醇浸泡15秒，然后用无菌水冲洗2‑3次，再用6%次氯酸钠溶液消毒8min，无菌水冲洗2‑3次，最后用0.1%的升汞溶液消毒12 min，无菌水冲洗4‑5次；（2）材料的处理：将消毒处理好的鳞片用无菌滤纸吸干，在无菌条件下将材料按照上、中、下部还有基部分割开来，分别切成5‑8mm的小块；（3）愈伤组织的诱导：将经过步骤（2）处理好的鳞片切块接种到愈伤组织诱导培养基中，PH6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，培养18‑22天可见愈伤组织的形成，所述愈伤组织诱导培养基为MS+琼脂6.0g/L+D1.5mg/L+6‑BA 0.5mg/L+ ZT 0.2mg/L +蔗糖15g/L；（4）继代培养：将步骤（3）中诱导的愈伤组织切下接种在继代培养基上，培养温度为24℃，光照周期12h/d，光强度为2300lux，PH6.0，所述的培养基为1/2MS+ 蔗糖35mg/L+6‑BA1.0mg/L +NAA0.2 mg/L +KT0.5mg/L，经过5‑8天时间分化出细芽后，升高培养温度到26℃，光照周期为14h/d，光强度为2600lx，继续培养7‑12天便可分化出一簇一簇的小鳞茎；（5）生根培养：将分化出来的小鳞茎一个个分别接种于下列诱导培养基中进行生根诱导： 3/4MS培养基+活性炭2.5mg/L+琼脂8g/L+IBA0.8mg/L，培养温度为22℃，光照周期12h/d，光强度为2200lux，PH值为6.0，经过22天左右根系长出5‑10个根时，即开始下一个阶段；（6）炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗6d，然后将长出新根的小鳞茎从培养瓶中取出，在阳光下晒1‑2天，在晒的过程中要适当遮光，使光照强度为自然光的60%，然后将其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠岩、黑钙土的混合比例为1∶1∶1∶3的苗床上；当外界夜间温度在5‑10℃，白天温度在15‑20之间时把试管苗进行移栽，在移栽初期的3天内，用塑料薄膜覆盖，以保持湿度在80%以上，并且控制光照强度在2700‑3200lx，之后逐渐揭去薄膜并适当增加光照，直至将移栽苗置于自然条件下。