[发明专利]一种利用组织培养技术快速繁殖仙客来的方法

摘要

本发明公开一种利用组织培养技术快速繁殖仙客来的方法，具体包括对外植体的选择与消毒处理、材料处理、愈伤组织的诱导和芽的分化、继代培养、生根培养以及炼苗移栽等步骤，这种组织培养技术提高了仙客来的繁殖效率，也提高了球茎的利用率。

主权项

一种利用组织培养技术快速繁殖仙客来的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）外植体的选择与消毒处理：首先选用生长健壮、成熟的新鲜的仙客来球茎，剥去球茎最外层干皱的鳞片和基部残余老根，流水冲洗20min后放入清水中浸泡15min后，再在紫外灯下照射20min，继而转入超净工作台，在超净工作台上先用70 %的乙醇浸泡15秒，然后用无菌水冲洗2‑3次，再用5%次氯酸钠溶液消毒10min，无菌水冲洗2‑3次；然后迅速加入3 %双氧水浸泡杀菌8‑10 min ，浸泡过程中经常摇动烧杯，然后倒掉升双氧水液体，用无菌水冲洗4‑5次后，再用无菌水浸泡备用；（2）材料的处理：将消毒处理好的球茎用无菌滤纸吸干，在无菌条件下将材料按照上、中、下部分割开来，分别切成6‑8mm的小块，并且上、中、下部还有材料分别进行下一步培养；（3）愈伤组织的诱导和芽的分化：将经过步骤（2）处理好的球茎切块接种到愈伤组织诱导培养基中，PH6.5，培养温度为24℃，光照周期11h/d，光强度为2000lux，空气的相对湿度为70‑75%，培养18‑22天可以形成愈伤组织和芽的分化，所述愈伤组织诱导培养基为MS+琼脂6.0g/L+ GA31.5mg/L+6‑BA 1.2mg/L+ ZT 0.4mg/L +蔗糖25g/L；（4）继代培养：将步骤（3）中诱导的愈伤组织和分化出来的芽分别切下接种在继代培养基上，PH6.5，培养温度为24℃，光照周期12h/d，光强度为2300lux，空气的相对湿度继续保持在70‑75%，所述的培养基为1/2MS+蔗糖35mg/L +6‑BA2.0mg/L +NAA0.5mg/L +KT0.5mg/L+琼脂8.0g/L；经过15‑20天长出小球茎；（5）生根培养：将分化出来的小球茎分别接种于下列诱导培养基中进行生根诱导：MS培养基+ GA3 1.2mg/L+活性炭4.8mg/L+琼脂7g/L+IBA0.5mg/L+蔗糖15mg/L，培养温度为21‑23℃，光照周期11‑13h/d，光强度为2200‑2400lx，PH值为6.5，相对湿度为70%左右，经过28天左右根系长出5‑10个根时，即开始下一个阶段；（6）炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗一周左右，将长出新根的小鳞茎从培养瓶中取出，在阳光下晒1‑2天，在晒的过程中要适当遮光，然后将其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠岩、泥炭的混合比例为2∶1∶2∶3的苗床上；将小苗取出用自来水冲洗去根部的琼脂，避免损伤根，然后用高锰酸钾2000倍液浸泡8‑12min后把小苗进行移栽，在移栽初期的3天内，用塑料薄膜覆盖，以保持在85%以上高湿度，并且控制光照强度小于1400lx，之后逐渐揭去薄膜并适当增加光照，直至将移栽苗置于自然条件下。