[发明专利]高表达外源蛋白的哺乳动物细胞株快速筛选有效
| 申请号： | 201310232148.3 | 申请日： | 2013-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN104087612B | 公开（公告）日： | 2017-02-22 |
| 发明（设计）人： | 侯永敏;李强;李屹晨;雷瑶 | 申请（专利权）人： | 广州优联康医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510663 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种快速筛选高表达外源蛋白的哺乳动物细胞株的方法。该方法应用新型的高效表达载体，实现目标蛋白在合适的哺乳动物宿主细胞中的高效表达，并通过独特的筛选方法，快速筛选获得高表达目标蛋白的细胞株。利用本发明的方法可大大减少筛选高表达目标蛋白细胞株的时间和成本，并显著提高外源蛋白在哺乳动物宿主细胞中的表达水平。 | ||
| 搜索关键词： | 表达 蛋白 哺乳动物 细胞株 快速 筛选 | ||
【主权项】：
一种哺乳动物细胞表达载体，其特征在于，所述的哺乳动物表达载体仅含有单个表达框，由一个强启动子带动目标基因、筛选标记基因和扩增标记基因表达,这些基因之间通过IRES序列连接；所述的单个表达框由如下顺序排列原件构成：(a)强启动子；(b)目标基因克隆位点；(c)合成的IRES元件；(d)扩增标记基因；(e)FMDV IRES元件；(f)合成的大肠杆菌EM7元件；(g)嵌合筛选标记基因；(h)转录终止子；和(i)启动在大肠杆菌中起始复制的PUC序列；所述的强启动子为CMV启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述的合成的IRES元件为合成的GTX IRES序列，所述的合成的GTX IRES核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述的FMDV IRES核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示;所述的扩增标记基因为DHFR基因；所述的合成的大肠杆菌EM7元件为人工合成的EM7元件，其核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；所述的嵌合筛选标记基因为ZEOr‑GFP, 其核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示;所述转录终止子为SV40终止子。
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