[发明专利]一种提高猪克隆胚胎体外发育效率的方法有效
| 申请号： | 201310243587.4 | 申请日： | 2013-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN103333918A | 公开（公告）日： | 2013-10-02 |
| 发明（设计）人： | 宋振威;丛佩清;冀倩倩;赵海静;何祖勇;陈瑶生 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12N15/873 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 谢敏楠 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明具体公开了一种提高猪克隆胚胎体外发育效率的方法。本发明对骨髓来源的间充质干细胞进行了分子鉴定，建立了通过6通道流式技术利用少量细胞即可鉴定细胞纯度的方法；然后对猪骨髓间充质干细胞进行基因修饰，获得了表达多种重编程因子的猪骨髓间充质干细胞；利用荧光流式分选方法，分离出了阳性猪骨髓间充质干细胞，将其继续培养3~7days，再作为核供体细胞进行核移植，考察了4RFs-3days，6RFs-3days，4RFs-7days，6RFs-7dayspMSC作为核供体细胞对猪克隆胚胎发育效率提高的影响；结果显示，4RFs-7dayspMSC能更好地促进克隆胚胎的分裂以及囊胚的形成，有助于克隆胚胎形成较均一细胞数量的同质状态，为大规模高效地克隆成年优良品种猪奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 克隆 胚胎 体外 发育 效率 方法 | ||
【主权项】：
一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.分离纯化猪骨髓间充质干细胞；S2.将Oct4、Klf4、c‑Myc和Sox2 4种重编程因子或Oct4、Klf4、c‑Myc、Lin28、Nanog和Sox2 6种重编程因子转入猪骨髓间充质干细胞中进行超表达；利用流式荧光筛选技术分选出含有4种重编程因子或6种重编程因子的猪骨髓间充质干细胞；在体外培养3~7天，即可作为核供体细胞进行核移植。
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