[发明专利]一种大量快速提取鲎素肽的方法有效
申请号: | 201310244598.4 | 申请日: | 2013-06-19 |
公开(公告)号: | CN103275191A | 公开(公告)日: | 2013-09-04 |
发明(设计)人: | 韩钊;辛鹤林;苑庆华;吴梦楠;梁玲玲;李萌;李彦彩 | 申请(专利权)人: | 天津兰瑞生物技术有限公司 |
主分类号: | C07K7/08 | 分类号: | C07K7/08;C07K1/34 |
代理公司: | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人: | 韩奎勇 |
地址: | 300384 天津市滨海新区华苑产*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | 本发明涉及一种大量快速提取鲎素肽的方法,该方法步骤包括:⑴收集鲎血细胞备用,将鲎血细胞悬浮于Tris-HCl,NaCl缓冲液匀浆,离心弃上清液,沉淀用同一缓冲液洗两次;⑵沉淀以固液1:6.5~8的比例加入酸液匀浆,离心收集上清液,其沉淀用酸液重抽提三次,得酸抽提液;⑶将酸抽提液用NaOH调节pH至6.5,离心去除沉淀;再用0.1-0.22μm的膜进行过滤,得上清液;⑷将上清液沸水浴处理,离心弃沉淀收集上清液;再用0.1-0.22μm的膜进行过滤,得上清液;⑸截留分子量为10kD超滤膜处理;⑹截留分子量为3kD超滤膜处理;⑺脱盐处理;⑻冷冻干燥制备成干粉。本方法鲎素肽得率及纯度高,工艺简化,时间大幅缩短,大大降低成本,处理量大幅提升。 | ||
搜索关键词: | 一种 大量 快速 提取 鲎素肽 方法 | ||
【主权项】:
一种大量快速提取鲎素肽的方法,其特征在于:该方法的步骤如下:⑴原料处理:a,收集鲎血细胞备用;b,将鲎血细胞悬浮于Tris‑HCl,NaCl缓冲液匀浆;c,然后8000r/min下离心30min,弃上清液,所收集的沉淀用同一缓冲液洗两次;⑵酸解:a,洗涤后的沉淀以固液比例1:6.5~8的比例加入酸液匀浆;b,匀浆液在8000r/min,离心30min,收集上清液;c,其沉淀用酸液重抽提,同样收集上清液,最后弃去沉淀,三次收集的上清液即为所需的鲎血细胞酸抽提液;⑶调pH值去沉淀:a,将鲎血细胞酸抽提液用NaOH调节pH至6.5,离心去除沉淀;b,再用0.1-0.22μm的膜进行过滤,得上清液;⑷热变性处理:a,将上步所得上清液沸水浴处理5~10min,8000r/min离心20min弃沉淀收集上清液;b,再用0.1-0.22μm的膜进行过滤,得上清液;⑸截留分子量为10kD超滤膜处理;⑹截留分子量为3kD超滤膜处理;⑺脱盐处理;⑻冷冻干燥制备成干粉低温保存。
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