[发明专利]一种生物安全性好的纳米荧光探针的制备方法

摘要

本发明的主要是利用一种生物安全性极好的天然高分子材料壳聚糖来包裹荧光蛋白质以提高其稳定性，扩展其使用领域和范围。该制备步骤包括吸附和交联，十分简单易行、包裹效率极高，所得的纳米颗粒具有很好的稳定性、分散性和生物安全性，且可以保护蛋白质不易被酶解和变性，还具有保护荧光不易淬灭和光漂白等优良性能。且体外实验表明该材料可以成功进入细胞，并且作为一种生物安全性好的荧光探针应用于分子水平上。

主权项

一种生物安全性好的纳米荧光探针的制备方法，先将壳聚糖质子化，然后静电吸附于荧光蛋白质表面，再用戊二醛作为交联剂对表面的壳聚糖进行交联，即可得包裹各种荧光蛋白质的壳聚糖纳米颗粒，其特征在于该方法具有以下的工艺步骤：a. 壳聚糖的质子化处理：将壳聚糖完全溶解于盐酸溶液中，加入3‑5倍于盐酸体积的无水乙醇溶液，将沉淀物烘干研磨得质子化壳聚糖的固体粉末； b. 包裹蛋荧光白质的壳聚糖纳米颗粒的制备：将荧光蛋白质加入到pH值7.0‑10.0的10‑50mM的缓冲溶液中，加入上述质子化壳聚糖，壳聚糖中氨基葡萄糖单元与荧光蛋白质的摩尔比为2000:1‑10000:1，室温搅拌至完全溶解后，加入戊二醛水溶液，戊二醛与氨基葡萄糖单元的摩尔比为0.35:1‑0.7:1，室温搅拌至反应完全后，超滤洗涤三次以除去未反应的壳聚糖，即可得包裹荧光蛋白质的壳聚糖纳米颗粒；c. 将所得的包裹荧光蛋白质的壳聚糖纳米颗粒分散在培养基中，与Hela细胞共同培养2‑48 h，用激光共聚焦显微镜拍摄，显示可以成功的进入Hela细胞并在分子水平上成像。