[发明专利]一种拟堇花兰快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种堇花兰快速繁殖方法：以拟堇花兰花梗为外植体材料，用适量的洗洁精清洗后，在流水中冲洗0.5h，在0.1％氯化汞溶液中表面灭菌10min，接种于初始诱导培养基上，30d后获得丛生芽，丛生芽分切后在生根培养基上，30d后获得无菌生根苗；无菌苗叶片接种至胚状体诱导培养基，培养35d后，叶片切口处诱导出胚状体；将诱导出的胚状体转接至胚状体增殖分化培养基，分化形成类圆球茎及小植株；将类原球茎以及小植株接种到丛生芽增殖培养基上；丛生芽分切后接种至生根培养基上，30d后获得获得拟堇花兰无菌生根苗；待无菌苗长有2～3条根时，进行炼苗移栽。

主权项

一种堇花兰快速繁殖方法，其特征在于，以拟堇花兰花梗为外植体材料，用适量的洗洁精清洗后，在流水中冲洗0.5h，在0.1％氯化汞溶液中表面灭菌10min，接种于初始诱导培养基上，其成分为：3g/L花宝1号+2mg/L6‑BA+0.5‑1mg/L NAA，30d后获得丛生芽，丛生芽分切后在生根培养基上，成分为：3g/L花宝1号+1.5mg/L NAA+蔗糖20g/L中培养，30d后获得拟堇花兰无菌生根苗；挑选高度约2.5cm生长状态良好的拟堇花兰无菌生根苗作为胚状体诱导的材料，在无菌条件下取生根苗第3‑4片叶，将叶片切成长约1cm的段，接种至胚状体诱导培养基，该诱导培养基成分为：3g/L花宝1号+2mg/L TDZ+0.5～1.5mg/L NAA；培养35d后，叶片切口处诱导出胚状体；将诱导出胚状体的叶片转接至胚状体增殖分化培养基；增殖分化培养基成分为：3g/L花宝1号+1mg/L TDZ+0.5mg/L NAA；培养30d，此时胚状体已分化出类原球茎及小植株；将类原球茎以及小植株接种到丛生芽增殖培养基上，丛生芽增殖培养基成分为：3g/L花宝1号+2mg/L6‑BA+0.5～1mg/L NAA；每20d继代一次，类原球茎逐渐分化为小植株，并以丛生芽的形式不断增殖；丛生芽分切后接种至生根培养基上，生根培养基成分为2mg/L花宝1号+1.5mg/L NAA+蔗糖20g/L，30d后获得获得拟堇花兰无菌生根苗；待无菌苗长有2～3条根时，进行炼苗移栽，揭开培养瓶的瓶盖，于室内自然光下炼苗5‑7d后，小心取出瓶苗，洗净根部附着的培养基，稍晾干，当根部变白时用湿水苔包裹种植，温度控制在24‑26℃，湿度保持在90％；所有培养基均添加蔗糖30g/L，固体培养基添加琼脂粉7g/L，pH值均为6.5；培养条件为温度25℃，光照16h/d，光强3000Lux。