[发明专利]一种RNA片段及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种制备RNA片段的方法，该方法包括（1）获得化学合成的双链DNA；（2）将所述化学合成的双链DNA片段克隆至载体中以得到多个克隆的扩增质粒，并分别对多个克隆的扩增质粒进行DNA测序；挑选能够完全正确编码目的RNA片段的扩增质粒的克隆作为模板质粒；（3）对模板质粒进行酶切，得到酶切产物，并从酶切产物中分离能够完全正确编码目的RNA片段的转录模板片段；（4）对所述转录模板片段进行体外转录，得到转录产物。本发明还提供了如上所述的方法制备得到的RNA片段及其用途。本发明大幅度地提高了制备的RNA片段在序列和长度上的完全正确性和均一度。

主权项

一种制备15‑30nt的短RNA片段的方法，该方法包括：(1)获得化学合成的双链DNA，所述化学合成的双链DNA由编码链和模板链配对而成；在从所述编码链的5’至3’方向上，第一内切酶的酶切位点、启动子、目的RNA片段的编码DNA和第二内切酶的酶切位点依次连接；(2)将所述化学合成的双链DNA片段克隆至载体中以得到多个克隆的扩增质粒，并分别对多个克隆的扩增质粒进行DNA测序；挑选能够完全正确编码目的RNA片段的扩增质粒的克隆作为模板质粒；(3)使用第一内切酶和第二内切酶对模板质粒进行酶切，得到酶切产物，并从酶切产物中分离能够完全正确编码目的RNA片段的转录模板片段；其中，第二内切酶能够在目的RNA片段的DNA模板链的5’末端切开，以使转录模板片段的模板链的5’末端能够与目的RNA片段的3’末端形成平末端的双链，其中，第一内切酶为SnaBI或BtsCI；第二内切酶为BtsCI；(4)对所述转录模板片段进行体外转录，得到含有目的RNA片段的转录产物；其中，所述启动子为T7启动子、SP6启动子或T3启动子。