[发明专利]一种快速低成本纯化CYP119酶的方法有效
| 申请号： | 201310264044.0 | 申请日： | 2013-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN103305482A | 公开（公告）日： | 2013-09-18 |
| 发明（设计）人： | 蒋华麟;张为波;陈萍华;罗胜联;罗旭彪 | 申请（专利权）人： | 南昌航空大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02 |
| 代理公司： | 南昌洪达专利事务所 36111 | 代理人： | 刘凌峰 |
| 地址： | 330000 江西省*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种快速低成本纯化CYP119酶的方法，其方法在于：将含有CYP119酶的大肠杆菌裂解，加热，离心除去沉淀，收集上清。逐渐向上清中加入(NH4)2SO4固体，至其质量百分比浓度为40%，离心去除沉淀，收集上清。逐渐向上清中加入(NH4)2SO4固体，至其质量百分比浓度为60%。离心后去除上清，收集沉淀。沉淀用10mMKH2PO4溶液溶解，即得到CYP119酶溶液。该方法条件温和、操作简便、速度快、成本低，采用这种方法，CYP119酶的纯度能达到80%左右，并且具有很好的活性。本方法在大规模提纯CYP119酶方面具有很好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 低成本 纯化 cyp119 方法 | ||
【主权项】：
一种快速低成本纯化CYP119酶的方法，其特征在于：（1）将含有CYP119酶的菌体裂解液，在60℃加热1小时，离心去除沉淀，收集上清；（2）在0.5小时内逐渐向由（1）所得上清中加入(NH4)2SO4固体，至(NH4)2SO4最终质量百分比浓度为40%，离心去除沉淀，收集上清；（3）在0.5小时 内逐渐向由（2）所得上清中加入(NH4)2SO4固体，至(NH4)2SO4最终质量百分比浓度为60%，离心去除上清，收集沉淀；（4）将由（3）所得沉淀用10 mM KH2PO4缓冲溶液（pH=2）在4℃缓慢搅拌溶解，即得到CYTP119酶的溶液。
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