[发明专利]一种提取纯化透明质酸的生产方法

摘要

本发明公开了一种提取纯化透明质酸的生产方法，目的在于解决现有的CPC络合乙醇沉淀技术纯化存在工艺线路长、生产周期长、劳动强度大，影响产品质量的人为因素较多，产品收得率相对较低的问题，该方法包括如下步骤：发酵液灭活、一次醇沉、粗分、复溶、一次过滤除杂、二次过滤净化、醇沉结晶、干燥粉碎。本发明针对现有的CPC络合乙醇沉淀技术纯化存在的问题，提供一种用于兽疫链球菌发酵法生产透明质酸的发酵液的工业提取纯化方法，该方法具有工艺线路及生产周期短，适应性强，生产成本低，效果好的特点。该方法可以概括为“二次过滤二次醇沉提取工艺”，并经过实验室小试、中试以及实际生产的检验，证明切实可行，能够满足工业化生产需要。

主权项

一种提取纯化透明质酸的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）发酵液灭活：将发酵液装入第一发酵罐中，搅拌，搅拌转速为40‑100转/min，再向第一发酵罐中加入三氯乙酸，调节发酵液的pH值至4.0‑4.5，搅拌30‑80min，得灭活发酵液；（2）一次醇沉：将灭活发酵液转移至第一沉淀罐中，向第一沉淀罐中缓慢加入灭活发酵液体积2‑2.5倍浓度95%的乙醇，开启第一沉淀罐中的气浮装置，同时搅拌30‑60min；（3）粗分：搅拌完成后，收集灭活发酵液上浮的透明质酸粗产品和第一沉淀罐底部的透明质酸粗产品，混合得第一透明质酸粗产品；（4）复溶：将第一透明质酸粗产品转移至第二沉淀罐中，向第二沉淀罐中加入第一透明质酸粗产品体积1.5‑3倍的去离子水复溶，得复溶液，再向复溶液中加入NaCl，使复溶液中NaCl的摩尔浓度为0.2‑0.6mol/L，再向其中加入复溶液质量1%‑3%的助滤剂、复溶液质量0.1%‑2%的活性炭、复溶液质量0.02%‑0.04%的EDTA，搅拌10‑30min后，得第二复溶液；（5）一次过滤除杂：将第二复溶液用板框过滤机过滤，收集滤液，得一次滤液；（6）二次过滤净化：向一次滤液中加入一次滤液质量1%‑3%的珍珠岩，再向第一滤液中添加氢氧化钠，调节第一滤液的pH值至8.5‑9.0，搅拌20‑50min，得二次滤液；（7）醇沉结晶：将二次滤液转移至结晶罐中，向结晶罐中加入氢氧化钠，调节二次滤液的pH值至6.5‑8.0，搅拌，搅拌转速为120‑200转/min，再向其中缓慢加入二次滤液2‑2.5倍体积的浓度为95%的酒精，进行醇沉造粒，酒精加入完成后，静置至二次滤液澄清，抽取结晶罐上部酒精，然后将二次滤液剩余部分用滤布离心分离，得含水透明质酸；（8）干燥粉碎：将含水透明质酸用丙酮或浓度为95%的酒精洗涤3‑5次，再在40‑60℃的条件下干燥，干燥后粉碎，即得产品；所述步骤（4）中，助滤剂由硅藻土和珍珠岩按质量比1:1.5‑4组成，活性炭为50‑180目；所述第一发酵罐、第一沉淀罐、第二沉淀罐、结晶罐的罐体内壁上分别设置有若干块挡流板。