[发明专利]一种全新高效的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明提供一种全新高效的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，进行规模化生产和繁殖以满足市场需要。花蕙兰组织培养步骤包括：A.外殖体消毒，B.愈伤组织诱导，C.不定芽诱导，D.丛生芽诱导，E.生根培养，F炼苗与移栽。采用植物组织培养的方法繁殖大花蕙兰，不仅不受外界条件的影响，四季皆可进行，节约苗木占地，降低生产成本，而且可以保存母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短时间内形成大量的优良试管苗，进行规模化、工厂化生产，为观赏园艺等产业提供大量的种苗。

主权项

本发明所述全新高效大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于：A外植体消毒：选取新抽出的新叶，从基部将叶片剪下，用0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤5～10min；流水冲洗10～20min后，置于在超净工作台上用75％的酒精漂洗30s；无菌水清洗4遍后，用含0.1％升汞灭菌5～15min；无菌水冲洗4～5遍，最后用无菌滤纸吸干表面水分。B愈伤组织诱导：将消毒好的大花蕙兰叶片切成1.0‑1.5cm的片段，接种到以下培养基中：WPM基本培养基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，植物生长激素0.1～2.0mg/L，适当pH值；培养温度28±1℃，光照强度1000～3000lx，光照时间10～16h，进行光照培养；C不定芽诱导：将诱导得到的愈伤组织接种到以下培养基中：WPM基本培养基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，植物生长激素0.2～2.0mg/L，适当pH值；培养温度28±1℃，进行光照培养30～40天D继代培养增殖：获得的不定芽在超净台上将其叶剪短，置于1/2WPM或WPM基本培养基，植物生长激素0.1～2.0mg/L，蔗糖(食用糖)20～40g/L，适当pH值，进行培养增殖。E生根培养：选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到如下培养基中：1/2MS或WPM基本培养基，，植物生长激素0.2～2.0mg/L，蔗糖(食用糖)20～40g/L，适当pH值，进行光照培养30～40天。F炼苗移栽：将组培瓶盖打开，并添加10～20ml的蒸馏水，进行有菌条件驯化2‑3d；用镊子将组培苗从瓶中取出，移栽到已经灭菌的栽培基质中，进行遮阴驯化3周，期间不定期的喷施1/2MS营养液。