[发明专利]木薯叶多酚氧化酶的制备方法有效
申请号: | 201310271582.2 | 申请日: | 2013-07-01 |
公开(公告)号: | CN103305483A | 公开(公告)日: | 2013-09-18 |
发明(设计)人: | 杨洋;候杰;严东;马万良;胡振兴;曾胜 | 申请(专利权)人: | 广西大学 |
主分类号: | C12N9/02 | 分类号: | C12N9/02 |
代理公司: | 广西南宁公平专利事务所有限责任公司 45104 | 代理人: | 翁建华 |
地址: | 530004 广西*** | 国省代码: | 广西;45 |
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摘要: | 一种木薯叶多酚氧化酶的制备方法,将新鲜木薯叶洗净剪碎,按每克木薯叶配制pH为6的磷酸缓冲液4毫升,在45℃下加入质量为木薯叶总质量0.8%的纤维素酶作用45分钟,5℃下用组织捣碎仪捣碎至糊状后冷冻浸提5小时,抽滤后收集滤液;在5℃下冷冻离心,收集离心液得木薯叶多酚氧化酶粗酶液;粗酶液纯化先采用硫酸铵进行分级沉淀,收集的沉淀溶于5℃预冷的磷酸缓冲液,再采用葡聚糖凝胶sephadex G-75纯化,即得木薯叶多酚氧化酶纯化液,经真空冷冻干燥制成木薯叶多酚氧化酶冻干粉。本发明由于木薯叶廉价、易得且活性高,提供了高活性的木薯叶多酚氧化酶,具有实际应用价值。 | ||
搜索关键词: | 木薯 叶多酚 氧化酶 制备 方法 | ||
【主权项】:
一种木薯叶多酚氧化酶的制备方法,其特征是将新鲜木薯叶洗净剪碎,按每克木薯叶配制pH为6的磷酸缓冲液4毫升,在45℃下加入质量为木薯叶总质量0.8%的纤维素酶作用45分钟,5℃下用组织捣碎仪捣碎至糊状后冷冻浸提5小时,用纱布抽滤,弃去滤渣收集滤液;在5℃下以12000r/min冷冻离心25分钟,收集离心液得木薯叶多酚氧化酶粗酶液;木薯叶多酚氧化酶粗酶液纯化先采用硫酸铵进行分级沉淀,收集40%至80%饱和度的沉淀,沉淀溶于5℃的磷酸缓冲液,再采用葡聚糖凝胶sephadex G‑75纯化,即得木薯叶多酚氧化酶纯化液,经真空冷冻干燥制成冻干粉,即得木薯叶多酚氧化酶。
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