[发明专利]一种小麦基因组定点改造方法有效
| 申请号： | 201310279303.7 | 申请日： | 2013-07-04 |
| 公开（公告）号： | CN103343120A | 公开（公告）日： | 2013-10-09 |
| 发明（设计）人： | 高彩霞;王延鹏;单奇伟;陈坤玲 | 申请（专利权）人： | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/82 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种小麦基因组定点改造方法。本发明的小麦基因改造方法，包含以下步骤：使小麦组织中含有向导RNA和Cas9核酸酶，然后在向导RNA和Cas9核酸酶共同作用下，目的基因上的双链靶标片段被剪切，再通过小麦细胞的自身DNA修复功能，最终实现小麦目的基因中靶标片段上的随机插入和/或随机缺失。实验证明，本发明方法能够成功地对小麦进行基因突变。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 小麦 基因组 定点 改造 方法 | ||
【主权项】：
一种实现小麦目的基因中靶标片段上的随机插入和/或随机缺失的基因改造方法，是利用CRISPR/Cas系统在小麦中对目的基因进行改造，该系统包括向导RNA和Cas9核酸酶，其特征在于：所述方法包含以下步骤：使小麦组织中含有向导RNA和Cas9核酸酶，然后在向导RNA和Cas9核酸酶共同作用下，目的基因上的双链靶标片段被剪切，再通过小麦细胞的自身DNA修复功能，最终实现小麦目的基因中靶标片段上的随机插入和/或随机缺失；所述靶标片段位于所述目的基因上；所述双链靶标片段中的一条链具有如下结构：5’‑NX‑NGG‑3’，N表示A、G、C和T中的任一种，14≤X≤30；所述向导RNA依次由能够与所述靶标片段互补结合的RNA片段和骨架RNA片段连接而成；所述骨架RNA片段依次由tracrRNA、crRNA嵌合形成类似发夹结构的RNA,所述骨架RNA片段可与Cas9核酸酶结合。
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