[发明专利]一种微囊包被卵黄源胆囊收缩素抗体的制备方法

摘要

本发明提供的一种微囊包被卵黄源胆囊收缩素抗体的制备方法，通过羊源CCK与BSA交联后加弗氏完全佐剂制备抗原复合物免疫产蛋鸡，收取鸡蛋从中获得卵黄源CCK抗体，取海藻酸钠水溶液与卵黄源CCK抗体液进行均质乳化，再将乳化好的溶液滴入壳聚糖、CaCl2组成的成囊溶液中进行包被，包被后的成品保护了胆囊收缩素卵黄抗体的有效活性，具有肠溶性。本发明利用微胶囊技术，选用壳聚糖和海藻酸钠为包被材料为天然多糖，价格便宜、内服且无任何毒副作用。

主权项

一种微囊包被卵黄源胆囊收缩素抗体的制备方法，其特征在于：分步实施；步骤1 胆囊收缩素抗原复合物的制备：将0.5mg CCK‑8与6.5mg 牛血清白蛋白溶于20ml 0.1M PBS、pH 7.0中，逐滴加入5ml戊二醛，室温搅拌4h，在4℃下用8000‑14000 Da的透析袋在pH 7.0的0.005M PBS中进行充分透析过夜；上述混合物需透析3天，每8小时换液一次；取10ml CCK‑BSA交联复合物加等量的弗氏完全佐剂乳化，乳化后，配成含抗原复合物的油包水型油乳疫苗；步骤2 卵黄源胆囊收缩素抗体制备：将鸡蛋用6ml/L新洁尔灭浸泡20min后，取出晾干，在无菌条件下，分离蛋黄，取卵黄液与去离子水1:9混合，pH调至5.2，4℃反应过夜，在12000 rpm,20 min,4℃条件下离心，弃沉淀；上清过滤，加饱和硫酸铵至终浓度300 g/L，在12000 rpm,20 min,4℃条件下离心，弃去上清，PBS溶解沉淀至原抗体水溶液体积的1/2，加饱和硫酸铵至终浓度190 g/L，将上述混合物混和均匀，在12000 rpm、20 min、4℃条件下离心，弃上清液，用少量0.1M PBS溶液溶解沉淀，透析20‑48h,每8h换液一次，4℃保存待用；步骤3 2.5%的海藻酸钠水溶液配制：称取2.5g海藻酸钠溶于100ml去离子水中，用磁力搅拌器搅拌至溶解，待用；步骤4 成囊溶液的配制：称取10g壳聚糖，加10%醋酸搅拌溶解，加去离子水稀释至1L，配制成1%壳聚糖溶液，其中成囊溶液的pH为4.5‑6.5；使用前，将1%壳聚糖溶液稀释成0.4%壳聚糖溶液，并加入3% CaCl2使之溶解，真空脱气，待用；步骤5 将卵黄抗体液1‑4：1缓慢加入到步骤3的海藻酸钠水溶液中，在高速匀浆机中均质乳化30min；步骤6将步骤5制成的卵黄抗体液与海藻酸钠水溶液滴入到步骤4成囊溶液中进行包被，滴加速度30r/min，磁力搅拌器上反应28‑32min，用去离子水洗净自然晾干，获得微囊包被的卵黄源CCK抗体产品。