[发明专利]白芨的种子组培繁殖方法

摘要

白芨的种子组培繁殖方法，属于中药材种植技术领域，包括引种灭菌、原球茎诱导培养、原球茎增殖培养、丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养、生根培养六大步骤，其有益效果是采用种子组培，所得到的幼苗污染率低，分化率高，遗传性状稳定，有效物质含量高；同时本发明方法还大大缩短了白芨的组培繁殖周期，从种子到生根苗的组培周期不到4个月，大大缩短了生产时间，降低了生产成本。

主权项

1.白芨的种子组培繁殖方法，包括引种灭菌、原球茎诱导培养、原球茎增殖培养、丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养、生根培养六大步骤，其特征在于具体方法如下：⑴引种灭菌：选取健壮的野生白芨蒴果，在流水下冲洗，放入1%洗洁精水溶液中浸泡5分钟，然后用刷子轻轻刷洗，并用无菌水充分洗净；在超净工作台上将种子放置在75％的酒精中消毒30秒钟后，再用0.1％的HgCl₂水溶液浸泡30min，然后用无菌水冲洗5～6次，然后置于无菌滤纸上吸干水分后从果实中部剥开，取出种子；⑵原球茎诱导培养：将种子迅速接种到原球茎诱导培养基上，在夜温20℃，日温22℃，相对湿度68%～70%，暗箱条件下进行种子诱导培养，6～8天后，种子开始萌动膨大；此时调整培养环境，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度70%～72%，光照强度2000lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行，再过6～8天后，形成直径1～2mm的原球茎；⑶原球茎增殖培养：将原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度70%～72%，光照强度3000lx，每天光照时长14小时的条件下进行原球茎增殖培养，再过9～12天后，获得大量直径1～2mm的原球茎；⑷丛生芽诱导培养：将生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在夜温22℃，日温24℃，相对湿度68%～72%，光照强度3000lx，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养，在15～20天后可观察到原球茎开始分化出芽点，然后将温度调整为夜温23℃，日温25℃，再过8-10天后，可观察到原球茎长出小芽并开始分叶，再过5-6天可看到大量茎长为1-2cm的丛生芽；⑸丛生芽增殖培养：当丛生芽茎长到1-2cm时，将其切分成单芽，转入到增殖培养基中，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度68%～72%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养，13～17天后可观察到大量新增殖的丛生芽；⑹生根培养：当增殖丛生芽长到3～4cm时，将其切分成单芽，转入生根培养基上进行生根诱导培养，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度72%～75%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行生根培养，28-32天后，可观察到大量3-4cm，每株有根须5-7根，且根须粗壮的白芨苗；上述组培繁殖方法中，所提到的各阶段培养基的配方是：原球茎诱导培养：MS+6-BA0.9mg／L+NAA0.11mg／L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L；pH=5.8；原球茎增殖培养：MS+6-BA1.1mg／L+NAA0.11mg／L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L；pH=5.8；丛生芽诱导培养：BM+BA4+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.8；丛生芽增殖培养：BM++IAA0.3+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.8；生根培养：BM+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.6。