[发明专利]一种制备重组人源血管内皮生长因子VEGF165的方法

摘要

本发明涉及制备重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165蛋白质的方法，包括步骤①构建用于表达不带标签的重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165的表达载体，②通过表达系统表达重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165，③分离和用阴离子交换柱纯化重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165。本发明还涉及用于上述方法制备的重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165蛋白质的复性方法和纯化方法。本发明所获得的rh‑VEGF165不含任何纯化标签同时也避免了使用肠激酶切除6×His‑Tag及后续从rh‑VEGF165中纯化去除6×His‑Tag标签和肠激酶的步骤，大大简化了rh‑VEGF165的纯化工艺，降低了生产成本，极大地方便了rh‑VEGF165的工业化生产。

主权项

一种制备重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165蛋白质的方法，该方法包括步骤：①构建用于表达不带标签的重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165的表达载体；②利用所述表达载体通过表达系统表达重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165；和③分离并用阴离子交换柱纯化所述表达系统中表达的重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165，其中，所述阴离子交换柱为DEAE柱，其中在分离纯化步骤之前进一步包括复性步骤，其中所述复性步骤包括利用包涵体复性液来复性重组人源血管内皮生长因子rh‑VEGF165蛋白质的包涵体，其中，所述包涵体复性液中包含浓度在2mM至10mM范围内的GSSG和浓度在1mM至5mM范围内的DTT，并且DTT与GSSG的摩尔浓度的比例大于等于1∶2.5并且小于等于1∶1.5，且其中，进行DEAE柱纯化之前仅进行一次复性透析。