[发明专利]一种茶碱人工抗原的制备方法有效
| 申请号： | 201310285736.3 | 申请日： | 2013-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN103360488A | 公开（公告）日： | 2013-10-23 |
| 发明（设计）人： | 王百龙;邵越水 | 申请（专利权）人： | 杭州博林生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/765 | 分类号： | C07K14/765 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种茶碱人工抗原的制备方法，第一步为半抗原的制备及检测：用5,6-二氨基-1,3-二甲基脲嘧啶(1)和戊二酸酐反应得到含羧基的半抗原；第二步为人工抗原的制备与检测：通过碳二亚胺法使之与牛血清蛋白(BSA)结合制备茶碱的人工抗原即茶碱-牛血清蛋白。所制备的茶碱人工抗原可进行动物免疫，取得相应的茶碱抗体，可用于各种茶碱类免疫分析法的研究，为茶碱的检测提供更加方便快速准确的途径。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 茶碱 人工 抗原 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种茶碱人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 制备人工半抗原：(a) 将5,6‑二氨基‑1,3‑二甲基脲嘧啶和戊二酸酐以摩尔比为1︰2加入圆底烧瓶中，室温下搅拌反应17小时；反应结束后反应液用油泵转干得到黄色固体产物；薄层层析检测：层析液体积比：无水乙醇︰浓氨水︰CHCL2︰1,4二氧六环=8︰1︰10︰1，产物Rf =0.2；(b) 向上一步产物中加入2N 的NaOH溶液75℃回流反应1.5 小时，经热水重结晶得到固体产物，即茶碱半抗原；薄层层析检测：层析液体积比：无水乙醇︰浓氨水︰CHCL2︰1,4二氧六环=8︰1︰10︰1，产物Rf =03； (2) 制备茶碱人工抗原：(c) 将茶碱半抗原与N‑羟基琥珀酰亚胺、环己基碳酰二亚胺以摩尔比为1︰1.5︰1.5溶于N,N‑二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应18小时，反应结束后离心取上清液记为A液；(d) 将氯化钠与十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠以摩尔比为78.3︰4.2︰1溶于双蒸水中，制备钠离子浓度为0.1mol/L的PBS缓冲液，pH为7.4；(e) 将牛血清蛋白溶于PBS缓冲液中，得到浓度为5mg/ml的B液；(f) 将A液缓慢滴加到B液，A液与B液的体积比为1︰5，得到的混合液在4℃条件下静置保存过夜，得到人工抗原混合液；(g) 将人工抗原混合液于PBS缓冲液中透析，透析结束后离心取上清液即得到人工抗原：茶碱‑牛血清蛋白。
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