[发明专利]一种坛紫菜耐低盐优良品系的筛选方法

摘要

本发明公开了一种坛紫菜耐低盐优良品系的筛选方法，具体方法：通过人工物理诱变法获得坛紫菜变异细胞，用生物工具酶将变异细胞单个分离并将其培养成完整叶状体，再用低盐胁迫处理叶状体圆盘，依据叶状体圆盘在低盐胁迫下的生长速度、藻体形态和色泽等指标，筛选出耐低盐能力强的突变叶状体，并将它们再次酶解获得单离体细胞进行再生培养。将获得的再生叶状体单个分离，利用单性生殖获得纯系丝状体。在低盐条件下，通过测试耐低盐优良品系的壳孢子和F1叶状体的低盐耐受性并进行特性分析后，证明为性状稳定的耐低盐优良品系，以自由丝状体的形式进行长期保存并推广应用。

主权项

一种坛紫菜耐低盐优良品系的筛选方法，其特征在于，包括以下具体步骤：（1）用60Co‑γ射线辐照坛紫菜野生品系的长4‑7cm小叶状体，并恢复培养28‑30天；（2）用海螺酶酶液处理诱变后的叶状体，分离出单离的细胞或原生质体，在MES培养液中培养成再生叶状体；（3）在日龄为50‑55天的再生叶状体上取直径为3‑4mm的圆盘体，再将其置于盐度为8ppt的培养液中胁迫处理30‑35天，培养液由海水、蒸馏水和MES培养基配制而成，依据圆盘体在低盐条件下的颜色、卷曲程度、生长速度和成熟早晚选拔出耐低盐能力强的再生叶状体圆盘；（4）再次酶解步骤（3）获得的耐低盐能力强的再生叶状体圆盘以获得单离细胞或原生质体，并把它们培养成再生植株，利用单性生殖技术，获得二倍体的纯系丝状体；（5）当纯系丝状体成熟后，获得其壳孢子和F1叶状体，分别对壳孢子进行包括存活率、分裂率、假根发生率和幼苗畸形率在内的低盐耐受性测试，对F1叶状体进行包括叶状体长度、特定生长率和绝对生长率在内的低盐耐受性测试，并对F1叶状体的叶绿素荧光活性、三种主要光合色素和色素蛋白的含量进行分析；根据测试和分析结果获得耐低盐优良品系，以自由丝状体的形式保存。