[发明专利]一种基于液相色谱/质谱联用的拟靶标代谢组学分析方法

摘要

本发明为一种基于液相色谱/质谱联用的拟靶标代谢组学分析方法，将待分析的样本按照组别分别制作合并样本，利用超高效液相色谱/四极杆‑飞行时间质谱的数据依赖采集模式自动采集各合并样本所含代谢物的二级质谱，采用定性分析软件提取所测得代谢物的保留时间、母离子及其子离子信息，根据子离子响应强度筛选出代谢物的特征离子对信息，并将各合并样本得到的特征离子对信息进行加和。然后在实际样本中，利用UHPLC/QQQ MS通过动态多反应监测模式对得到的代谢物特征离子对进行扫描，获得相应的谱图，然后通过定量分析软件进行积分，得到待测样本所含的代谢物及其含量信息。

主权项

一种基于液相色谱/质谱联用的拟靶标代谢组学分析方法，其特征在于：等量移取病人血清样本各50μL并进行合并，同时等量移取正常人血清样本各50μL并进行合并，分别得到疾病组和对照组合并样本；利用超高效液相色谱/四极杆‑飞行时间质谱用于合并样本中代谢物二级质谱采集；超高效液相色谱/四极杆‑飞行时间质谱的条件为：色谱柱为UPLC ACQUITY T3柱，2.1mm×100mm×1.8μm，柱温为35℃；流动相A为0.1％甲酸/水溶液，流动相B为0.1％甲酸/乙腈，流速为0.3mL/min；洗脱梯度为1％B起始并保持1min，1至5min线性升至40％B，5至8min线性升至50％B，8至10min线性升至65％B，10至16min线性升至76％B，16至20min线性升至100％B，在100％B保持5min，然后降至1％B并保持5min；质谱采用正离子模式，毛细管电压为4000V，去簇电压为175V，N2雾化气压为45psi，N2干燥气流速为9L/min，干燥气温度为350℃，一级质谱扫描范围为m/z 100～1000；二级质谱扫描范围为m/z 40～800，并分别在碰撞能为10V、20V和40V的条件下进行自动二级质谱扫描；然后利用定性软件从二级质谱的质谱数据中提取所测得样本中代谢物的保留时间、母离子及其子离子信息，根据子离子响应强度筛选出代谢物的特征离子对信息，并将各合并样本得到的特征离子对信息进行加和；最后在实际待测的所有单个的人血清样本中，利用超高效液相色谱/三重四极杆质谱通过动态多反应监测模式对得到的代谢物特征离子对进行扫描，并在相同的色谱条件下根据质谱响应优化各代谢物的去簇电压和碰撞能条件，获得相应的谱图，再通过定量分析软件对获得谱图中的色谱峰进行面积积分求和，得到待测样本所含的代谢物及其含量信息。