[发明专利]人乳头瘤病毒核酸检测方法和试剂盒

摘要

本发明涉及一种用于诊断人乳头瘤病毒(HPV)感染的检测方法，以及利用该方法制成的试剂盒检测患者体内分离出的DNA样本中HPV基因型以诊断其是否属于所述24个型中的某一型。属于生命科学和技术领域。本发明的方法包括一个以PCR为技术基础聚合酶链式反应(PCR)，包含针对多种型别的荧光标记的上游引物和未标记简并下游引物，在特定PCR条件下可在一个反应管中同时检测HPV6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4和cp8304等24种型的DNA，毛细管变性凝胶电泳后利用测序仪读取数据，利用提供的软件直接将其分为具体的型。

主权项

一种人类乳头瘤病毒检测的方法和试剂盒，其特征在于： 该试剂盒含有： (1)DNA提取：NP‑40；chelex100；TRIS‑HCL。 (2)DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶；UNG酶。 (3)PCR反应液：dNTPs，荧光标记引物，DNA聚合酶Buffer。 (4)PCR反应体系：DNA聚合酶选择Taq HS DNA聚合酶及荧光标记引物，如表1。 序列名称 核苷酸序列5’‑3’ 6 TTTTAACTACATCTTCCACATACAC 11 TGTCTAAATCTGCTACATACAC 16 TTTTATTATGTGCTGCCTTATTTACTTC 18 TTTGCTTCTACACAGTCTCCT 31 TTATGTCTGTTTGTGCTGC 33 TATGTCTGTTTGTGCTGC 35 TATGCTATTAAAAAACAAGATTCT 39 TTTGTGTTCTGCTGTGTCTTCTA 42 TTCATGACTTTTTGTGCCACTGC 43 TTTTTGCCTCTACTGACC 44 TCTACACAGTCCCCTCC 45 TTTTTTTGAGTCTTCCATACCTTCT 51 TTTTGCCTCTACACAAAAT 52 TTTTTTTTTCTGCTGCGGTTTCC 53 TTTTTCGCAACCACACAGTCTAT 56 TGTGCTGAGGATAAAAAG 58 TTTTTTTTACTGCTACAGAACAGTTAAGTAAATA 59 TGGGGCACTGAAGTAACTAAGG 66 TTTTTAAAAACACATTAACTAA 68 TTTTTTTTTTATTGTCCACTACTACAGACTC 73 TTGTAGGTACACAGGCTAGTAG 81 TTTTTCACTGCTGTTACTCAATCTGT 82 TTTTGCTACACAGGCAAATGAATACACA 83 TGCTACATCTGCTGCT 下游简并引物 CGTCCMARRGGAWACTGATC 表1 (5)标准品为为SIZ荧光标记引物扩增的长度为345、355、360、365、370和380的PCR产物。