[发明专利]一种分离培养家禽内皮祖细胞的方法

摘要

本发明公开了一种分离培养家禽内皮祖细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：采集外周血、分离收集得到单个核细胞、加入培养液进行细胞培养、用贴壁细胞和非贴壁细胞的混合物进行培养。根据本发明家禽内皮祖细胞的分离培养方法，可从家禽外周血中分离培养出大量EPCs。

主权项

一种分离培养家禽内皮祖细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：(1) 选取20日龄健康肉鸡，翅下静脉采集外周血；(2) 用L‑DMEM培养基按体积比1:1稀释外周血后，再按体积比1:1缓慢滴加到鸡淋巴细胞分离液中，2000 rpm离心15min后弃上清液，收集得到单个核细胞；(3) 将收集到的单个核细胞用L‑DMEM 培养基离心洗涤1‑2次，收集细胞，用EGM‑2培养基重悬细胞并计数；所述EGM‑2培养基含有体积百分比为10%的胎牛血清、100 IU/mL双抗以及血管内皮生长因子、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子‑1；(4) 分别将单个核细胞按5×107个/孔、1×107个/孔和1×106个/孔的量种植于用50μg/ml浓度的鼠尾胶原蛋白预先包被过的6孔细胞培养板中，置39℃、5% CO2培养箱中进行原代培养；每24h半量换液一次；5天后每24 h换液一次，7天后每48h换液一次直到传代。