[发明专利]一种从食醋发酵过程中提取微生物总基因组的方法

摘要

本发明涉及传统食醋发酵过程样品中微生物总基因组的通用提取方法，属于分子生物学技术领域。本发明要解决的技术问题是提供一种适合于从固态发酵、半固态发酵和液态发酵的不同状态的传统食醋样品中提取微生物总基因组的方法。本发明的微生物总基因组提取方法包括以下步骤：食醋发酵样品预处理、微生物基因组DNA的抽提、除杂及漂洗浓缩。本发明的基因组提取方法为原位提取，所需样品量少于5g，不需要添加蛋白酶、纤维素酶、蜗牛酶等制剂，提取的基因组纯度质量高，可直接用于后续分子指纹图谱分析、宏基因组学分析、PCR(聚合酶链式反应)扩增目的基因和克隆文库的构建。

主权项

一种从食醋发酵过程中提取微生物总基因组的方法，其特征在于，包括如下步骤：①食醋发酵样品预处理：取液态或半固态样品0.2‑5g在4℃6000‑8000×g离心10‑30min，弃上清，于‑80℃预冻后真空冷冻干燥，研磨样品至粉末状，待用；固态样品置于‑20℃预冷的无菌研钵中，倾入液氮，研磨样品至粉末状，待用。②微生物基因组DNA的抽提：向预处理后的样品中加入1.0mL‑2.0mL DNA提取液，置于37℃的恒温振荡摇床在200‑400rpm振摇15‑30min后，加入质量比1%‑5%的SDS，充分混匀后置于65℃水浴锅中孵育1‑3h，每15min‑20min颠倒几下，向抽提液中加入1‑2倍体积的PEG8000，室温放置1‑2h，10000‑12000×g离心10‑30min，弃上清，将沉淀溶于1‑2mL TE缓冲液,加入3‑5mol/L乙酸钾溶液,4℃放置15‑60min，12000‑15000×g离心10‑20min，取上清，加入等体积的酚‑氯仿‑异戊醇混合液，酚∶氯仿∶异戊醇体积比为25∶24∶1，12000‑15000×g离心10‑30min。③除杂及漂洗浓缩：吸取步骤②DNA抽提后的上清水相，加入等体积的氯仿‑异戊醇混合液，氯仿∶异戊醇体积比为24∶1，12000‑15000×g离心5‑10min，吸取上清，加醋酸铵‑异丙醇混合液，‑20～‑80℃放置1‑3h沉淀DNA，12000‑15000×g离心10‑20min，弃上清，取沉淀；用预冷的70%乙醇漂洗沉淀，12000‑15000×g离心5‑10min，弃上清，室温放置，直至乙醇挥发完全，加入50‑100μL双蒸水溶解沉淀，得到微生物基因组总DNA。