[发明专利]一种利用真皮来源的间充质干细胞制备组织工程脊髓的方法

摘要

本发明公开了一种利用人源性真皮多能干细胞制备组织工程脊髓的方法，包括如下步骤：1)分离dMSCs，传代得dMSCs原代细胞；2)将分离得到的dMSCs原代细胞移入扩增培养基中进行扩增；3)将组织工程脊髓材料饱和水溶液，滴加到含深神经营养素、维甲酸和Neuregulin的生理盐水溶液中，静置，梯度酒精脱水后，真空干燥；将扩增后的dMSCs，以脑源性神经营养素腺病毒表达载体感染，将细胞接种到工程脊髓材料材料上，进行培养。本发明的方法中，组织工程脊髓可有效地促进细胞增殖，其向神经元和少突胶质细胞分化的比例为4.8％和1.5％左右，远远高于单纯支架材料的1.8％和0.5％。

主权项

一种利用dMSCs制备组织工程脊髓的方法，包括以下步骤：1)、分离dMSCs将皮肤样品酒精消毒后，胰酶消化，然后将真皮组织剪成细胞片并碎吹打成细胞悬液，过滤后接种于含DMEM培养液的培养瓶中，2h后，将悬浮的细胞离心后转移到dMSCs生长培养基中进行培养，6h后，弃培养液和悬浮细胞，继续培养早期贴壁细胞，反复传代，至有集落样细胞群体生成，并传代得dMSCs原代细胞；2)、dMSCs快速扩增将分离得到的dMSCs原代细胞移入扩增培养基中进行扩增，所述扩增培养基中含有50‑80ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子2，或者含有FGF250‑100ng/ml和血小板源性生长因子30‑50ng/ml。3)、制备组织工程脊髓将组织工程脊髓材料饱和水溶液，滴加到含NT3、维甲酸和Neuregulin的生理盐水溶液中，静置，然后吸走培养皿中的液体，将组织工程脊髓材料经过梯度酒精脱水后，真空干燥；将扩增后的dMSCs，以脑源性神经营养素腺病毒表达载体感染，12h后收集细胞接种到上述的工程脊髓材料材料上，加入培养基培养。