[发明专利]一种基因定点突变的构建方法有效
| 申请号： | 201310320603.5 | 申请日： | 2013-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN103388006A | 公开（公告）日： | 2013-11-13 |
| 发明（设计）人： | 李大力;刘明耀;邱中伟 | 申请（专利权）人： | 华东师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) 31257 | 代理人： | 董红曼 |
| 地址： | 200062 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开一种基因定点突变的构建方法，确定大鼠目标基因组序列中可被人工改造CRISPR-Cas系统所识别的靶序列；构建能够识别并引导CAS蛋白至目标基因靶序列的引导RNA序列(guide RNA，gRNA)；将上述gRNA序列与CAS蛋白编码核酸序列或者gRNA序列和体外表达的CAS蛋白混合物导入大鼠胚胎细胞。本发明无需构建同源重组打靶载体、无需进行ES打靶细胞筛选，突变体比例高，操作简便，可实现多位点同时敲除，能够大幅度降低实验成本和缩短实验周期。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基因 定点 突变 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种基因定点突变的构建方法，其特征在于，包括：(1)在大鼠目标基因组序列中确定CRISPR‑Cas系统所靶向的靶序列；(2)设计、构建能够识别并引导CAS蛋白至目标基因靶序列的gRNA核酸序列；(3)将所述gRNA核酸序列与编码CAS蛋白的核酸序列或蛋白质导入所述大鼠胚胎细胞内。
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