[发明专利]一种碎米花组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明涉及一种碎米花组织培养快速繁殖方法，该方法包括以下的步骤：1）外植体的选择；2）外植体灭菌；3）腋芽诱导培养；4）增殖培养；5）壮苗培养；6）瓶外生根。本发明以当年开花嫩茎段为外植体，以WPM或Anderson为基本培养基，利用ZT激素，成功建立了有效的碎米花组培快繁体系，10月份瓶外生根的组培苗并能实现在翌年春季开花。本发明一个增殖继代周期内（4-6周）增殖系数控制在4-5倍，一年内增殖系数为1万倍左右，极大提高了碎米花的繁殖系数，为该物种的保存和利用提供了实用科学的繁殖方法，为碎米花药用开发提供材料。

主权项

一种碎米花组织培养快速繁殖方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：1）外植体的选择：春季从已开花碎米花母株上剪取带有潜伏芽的新发枝条；2）外植体灭菌：剪去枝条叶片，先用自来水浸泡并冲洗10‑20分钟，用洗洁精洗涤1‑2次后吸干；然后，用无菌水冲洗3‑5遍，再用0.1％氯化汞消毒8‑12分钟，最后用无菌水冲洗3‑5遍后吸干；3）腋芽诱导培养：将灭好菌的枝条切除茎尖，余下的枝条剪成2‑3cm长的茎段，每段带有1‑2个腋芽，斜插入诱导培养基中；于23‑26℃，光16小时，黑8小时，培养3‑5周后，茎段潜伏芽发育生长出新枝条至2‑4cm长；所述的诱导培养基由以下组分构成：WPM或Anderson基本培养基 + ZT 1.0‑2.0 mg/L + NAA0.05‑0.1 mg/L + 20 g/L 蔗糖或白糖 + 6‑10 g/L 琼脂，pH4.8‑5.2，高温灭菌；4）增殖培养：剪取新长出的枝条，去顶芽后插入增殖培养基中，于23‑26℃，光16小时，黑8小时，培养4‑6周后，茎段长出丛生芽；此阶段可重复进行；所述的增殖培养基由以下组分构成： WPM或Anderson基本培养基 + ZT 0.5‑1.0 mg/L + NAA 0.05‑0.1mg/L + 20g/L 蔗糖或白糖 + 6‑10 g/L 琼脂，pH 4.8‑5.2，高温灭菌；5）壮苗培养：将长到1‑2cm长的丛生芽剪切移入壮苗培养基中，于23‑26℃，光16小时，黑8小时，培养2‑4周，待长到3‑5cm后移入基质中，进行瓶外生根；所述的壮苗培养基由以下组分构成：WPM或Anderson基本培养基+ ZT 0.25‑0.5 mg/L + NAA0.01‑0.05 mg/L + 20g/L 蔗糖或白糖 + 6‑10 g/L 琼脂，pH 4.8‑5.2，高温灭菌；6）瓶外生根：在每年10至次年3月，将长到3‑5 cm高的瓶苗在室外放置1周，洗去枝条上的琼脂后移入含有含泥炭：珍珠岩：蛭石体积比2：1：1的基质中，在保湿保温条件下生长，1‑2个月后生根。