[发明专利]杨树内生菌球毛壳抗生物质的鉴别与检测方法

摘要

本发明公开了一种杨树内生菌球毛壳抗生物质的鉴别与检测方法，以杨树内生真菌球毛壳为供试菌株，利用捷克八溶剂系统纸色谱方法对该内生菌的抗生物质进行理化性质初步分析;用高效液相色谱法检测分析该菌粗提液的活性成分及对杨树腐烂病菌的抑菌效果;对抗生物质液体培养的主要动力学指标进行分析。为杨树内生菌球毛壳抗生物质的使用提供了理论依据。

主权项

一种杨树内生菌球毛壳抗生物质的鉴别与检测方法，其特征在于：包含有如下步骤：A、鉴别：将杨树内生菌球毛壳的萃取浓缩液滴在纸层析板上，在捷克八溶剂系统中进行层析试验，测定得到萃取浓缩液活性斑点的Rf 值，然后做出纸层析色谱图，所述捷克八溶剂系统(V /V)包括:a、水饱和的正丁醇; b、水饱和的正丁醇，内含2 % 对甲苯磺酸; c、正丁醇:乙酸:水体积比为:2:1:1; e、水饱和的正丁醇，内含2%六氢吡啶;f、以正丁醇饱和的0. 5 mol/L、pH7磷酸缓冲液; g、正丁醇饱和的水，内含2%对甲苯磺酸;h、苯∶甲醇体积比为4:1，本系统所用滤纸先用0. 5 mol/L、pH 7 磷酸缓冲液处理后晾干; 8) 甲醇∶水体积比为3∶1，水内含3% NaCl；B、检测：采用pH 纸层析和高效液相色谱两种检测方法：A、pH 纸层析检测：取新华1 号层析滤纸，将所述新华1 号层析滤纸分别用pH 2. 2，3. 0，4. 0，5. 0，6. 0，7. 0，8. 0，9. 0，10. 0 的缓冲溶液处理干燥，将球毛壳抑菌活性物质点于距离滤纸底端0.3‑1 cm 处，点样量为3‑8μL，在二氯甲烷和甲醇的展层溶剂中进行上行展层，展层距离为10‑20cm，重复3 次；室温展层结束后，取出滤纸条在无菌操作台上晾干，然后采用平板生物显影法测其抑菌活性物质的展层距离，根据抑菌圈的位置确定活性物质在不同溶剂中的展层距离，做出纸层析色谱图；B、高效液相色谱检测   将球毛壳抑菌物质用少量甲醇溶解，经微孔有机滤膜过滤后，用高效液相色谱仪Agilent 1200分析，高效液相色谱的条件为: 色谱柱Zorbaxeclipse XDB‑C18，150 mm × 4. 6 mm，流动相为甲醇∶水的体积比为65∶35，等度洗脱，流速0.5‑2 mL/min; 进样量10‑30μL; 柱温为25 ℃; 紫外检测波长为254 nm。