[发明专利]一种重组长效人透明质酸酶、其编码基因、生产方法及应用

摘要

本发明公开了一种重组长效人透明质酸酶，为人透明质酸酶PH20细胞外部分与人源蛋白（人白蛋白HSA片段或人免疫球蛋白IgG2Fc片段）的融合蛋白PH20‑HSA或PH20‑IgFc，其氨基酸序列分别如SEQ ID No.4或SEQ ID No.5所示，具有体内安全性高、半衰期长的优点；本发明还公开了上述重组长效人透明质酸酶的编码基因、表达载体、宿主细胞、生产方法及稳定制剂，使用富含GC高表达系统表达和中国地仓鼠细胞（CHO）生产可达到工业化水平和得到有活性能纯化的产物；本发明还公开了上述重组长效人透明质酸酶在配合给药及生产小分子透明质酸中的应用。

主权项

一种生产重组长效人透明质酸酶的方法，所述重组长效人透明质酸酶为人透明质酸酶PH20细胞外部分与人源蛋白的融合蛋白，所述人源蛋白为人白蛋白HSA片段或人免疫球蛋白IgG2Fc片段；人透明质酸酶PH20细胞外部分与人白蛋白HSA片段的融合蛋白为PH20‑HSA，其氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；人透明质酸酶PH20细胞外部分与人免疫球蛋白IgG2Fc片段的融合蛋白为PH20‑IgFc，其氨基酸序列如SEQ ID No.5所示，其特征在于，所述方法包括：使用富含GC的动物细胞表达载体pMH3、pMH4或pMH5在中国地仓鼠细胞CHO内表达基因序列SEQ ID No.6或SEQ ID No.7以获得所述的PH20‑HSA融合蛋白或PH20‑IgFc融合蛋白，然后进行分离纯化即得；所述表达载体pMH3、pMH4或pMH5的基因序列分别如SEQ ID No.8、9、10所示。