[发明专利]基于细胞培养技术的人参皂甙提取方法

摘要

本发明涉及生物微分子提取技术领域，尤其是基于细胞培养技术的人参皂甙提取方法，本发明利用多年生人参的根细胞培养，利用酶技术缩短细胞培养周期，来生产人参皂甙及多糖的方法。本发明采用细胞培养法来培养和生产人参植物细胞，进而提取人参皂甙和多糖，种子细胞收集时加入纤维素酶，能提高种子细胞收集率5%-10%，种子细胞培养中，加入生长素、果胶酶能诱使组织细胞加快生长繁殖，缩短培养周期，约能够减少1/4—1/6时间，有效降低了培养过程的感染率，提高产品收率。本发明工艺简单、稳定，并利用了酶技术缩短了细胞培养周期，提高收率，适合工业化生产。

主权项

基于细胞培养技术的人参皂甙提取方法，其特征在于，，是一种利用多年生人参的根细胞培养，利用酶技术缩短细胞培养周期，来生产人参皂甙及多糖的方法，具体流程为：（1）种子细胞采集：①取新鲜的多年生人参的根清洗消毒，将洗净的人参块根用10‑20%次氯酸钠溶液浸泡10‑30分钟，用无菌水清洗块根至次氯酸钠无残留；②将清洁后的块根放入打浆机加入MS培养基，每1.5g加入10ml，打浆；③将打浆液加入纤维素酶100mg/kg，放置3‑5小时，用50‑80微米孔径的微孔滤器过滤，滤液用低速离心机分离，去杂质及上清液收集种子细胞；（2）种子细胞培养：①将收集到的种子细胞接种到含改良MS培养基的种子罐中，接种量为10‑20g/L，调pH5‑6，温度20‑25℃；②摇床或震荡种子罐培养20‑30小时，计算细胞数量20000‑40000个/ml，即可扩大培养；（3）细胞扩大培养：①将培养好的种子细胞接种于有机械搅拌的生物反应器内，悬浮培养，培养基用改良的MS培养基，接种量为15‑25g/L，搅拌速率90‑120r/min，pH5‑6，通入过滤空气，速率0.01‑0.05m³/s；②加入生长素2,4‑D0.5‑1mg/L，果胶酶50‑80mg/L，暗培养20‑25天，细胞计数35000‑50000/ml即停止培养；（4）采用离心或其他方法收集人参植物细胞，即可用常规方法提取人参皂甙及多糖。