[发明专利]一种羊关节炎-脑炎病毒前病毒DNA实时荧光PCR试剂盒有效
| 申请号： | 201310337382.2 | 申请日： | 2013-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN103388035A | 公开（公告）日： | 2013-11-13 |
| 发明（设计）人： | 王建华;赵祥平;陈本龙;王玉玲;王乃福 | 申请（专利权）人： | 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 天津市鼎和专利商标代理有限公司 12101 | 代理人： | 朱瑜 |
| 地址： | 300456 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种羊关节炎-脑炎病毒前病毒DNA实时荧光PCR试剂盒及检测方法，具有检测灵敏度高，特异性好、操作简便、快速的特点，避免了常规PCR方法的假阳性。 | ||
| 搜索关键词： | 种羊 关节炎 脑炎 病毒 dna 实时 荧光 pcr 试剂盒 | ||
【主权项】：
一种羊关节炎‑脑炎病毒前病毒DNA实时荧光PCR试剂盒,包含实时荧光PCR预混液、上游引物、下游引物、探针、阳性对照、阴性对照；其特征在于：1）引物及探针通过选取山羊关节炎‑脑炎病毒基因组的CA基因作为PCR扩增的靶序列，设定合成特异性的引物和TaqMAN‑MGB探针；其序列为：CAF1：5‑CAGTGGATCAGATTATGG‑3CAR1：5‑TGCTCTTAAGGCTATTATTAC‑3CAP1：5‑FAM‑AATCAAGCAGCAGCACAAGC‑TAMRA‑32）阳性对照为含有目标扩增序列的阳性对照质粒pGEM T‑CA质粒；通过人工合成一段含有扩增靶序列的基因片段，与pGEM T载体连接，转化DH5α大肠杆菌，挑选及鉴定阳性重组菌，提取重组质粒，用去离子水溶解即得；3）阴性对照为提取的正常山羊外周血淋巴细胞基因组DNA；通过将山羊抗凝血以淋巴细胞分层液分离外周血淋巴细胞，然后用市售的血液基因组提取山羊外周血淋巴细胞基因组DNA，用去离子水溶解即得。
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