[发明专利]微型观赏红叶石楠叶片离体培养方法

摘要

微型观赏红叶石楠叶片离体培养方法，采用多年生微型观赏红叶石楠当年生嫩叶片为外植体，经消毒灭菌后，接种于诱导愈伤组织培养基中，先置于黑暗条件下10-15天，再置于普通日光灯下，每日光照15小时，温度20-25℃、湿度50％-60％，培养48天，诱导形成愈伤组织；将形成的愈伤组织，剪切，转接于经消毒分化增殖培养基中，进行增殖培养，不断增殖，将增殖的试管芽苗剪切后接种于经消毒壮苗培养基中，进行壮苗培养，30天后去掉基部愈伤组织和部分叶片，留3-4片叶片，接种于经消毒的生根培养基中，进行生根培养8-10天，取出清洗，移栽到含有泥炭和黄心土体积比为泥炭：黄心土＝3∶2的基质中，15天后生根成活，生根率达96％以上。

主权项

微型观赏红叶石楠叶片离体培养方法，其特征是按下列步骤进行：(1)准备基本培养基，有2种。一种是诱导愈伤组织形成的培养基，每升基本培养基中含有：硝酸钾1520‑1900mg，硝酸铵1320‑1650mg，磷酸二氢钾136‑170mg，硫酸镁296‑370mg，二水氯化钙440mg，碘化钾0.83mg，硼酸6.2mg，四水硫酸锰22.3mg，七水硫酸锌8.6mg，二水钼酸钠0.25mg，五水硫酸铜0.025mg，氯化钴0.025mg，七水硫酸亚铁27.8mg，乙二胺四乙酸钠37.3mg，维生素B10.1mg，维生素B60.5mg，VB50.5mg，甘氨酸2.0mg，肌醇100mg，蔗糖30000mg，卡拉胶6500mg。另一种是除了诱导愈伤组织形成培养外的分化增殖培养、壮苗培养、生根培养的培养基，每升基本培养基中含有：四水硝酸钙371‑556mg，硝酸铵268‑400mg，硫酸钾600‑990mg，七水硫酸镁248‑370mg，磷酸二氢钾115‑170mg，二水氯化钙72‑96mg，四水硫酸锰22.4mg，七水硫酸锌8.6mg，硼酸6.2mg，五水硫酸铜0.25mg，二水钼酸钠0.25mg，七水硫酸亚铁34.1mg，乙二胺四乙酸钠46.6mg，维生素B11.0mg，维生素B60.5mg，VB50.5mg，甘氨酸2.0mg，肌醇100mg，蔗糖20000mg，卡拉胶6500mg。(2)采用多年生微型观赏红叶石楠的当年生嫩叶片为外植体，经70％酒精消毒20‑30秒，再用0.1％的升汞溶液灭菌8‑10分钟，用无菌水冲洗3‑5次；(3)在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种在经消毒的含有诱导愈伤组织培养基的三角瓶中，先将其置于黑暗条件下10‑15天后，再置于普通日光灯为光源、光照强度为1500‑20001x下，每日光照15小时，温度20‑25℃、湿度为50％‑60％，培养48天，长成愈伤组织；所述的诱导愈伤组织培养基为：每升基本培养基含：玉米素0.5‑1.0毫克、6‑苄基嘌呤0.5‑1.0毫克、α‑萘乙酸0.1‑0.2毫克、2，4‑二氯苯氧乙酸0.5‑1.0毫克；(4)将从(3)步中培养的愈伤组织，剪切，转接于经消毒的含有分化增殖培养基的三角瓶中，进行增殖培养，不断增殖，视繁殖生产规模需要达2000 左右瓶进入下一步；所述的分化增殖培养基为：每升基本培养基含：玉米素1.0‑2.0毫克、6‑苄基嘌呤1.0‑2.0毫克、α‑萘乙酸0.05‑0.1毫克；(5)将(4)步中培养的试管芽苗，剪切，接种于经消毒的含有壮苗培养基的三角瓶中，进行壮苗培养，30天后进入下一步；所述的壮苗培养基为：每升基本培养基含：玉米素0.5‑1.0毫克、6‑苄基嘌呤0.5‑1.0毫克、α‑萘乙酸0.1‑0.2毫克；(6)将(5)步中的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留3‑4片叶片，接种于经消毒的含有生根培养的培养基的三角瓶中，进行生根培养8‑10天；所述的生根培养基为：每升基本培养基含：α‑萘乙酸0.3‑0.5毫克、吲哚乙酸0.4‑0.8毫克和柠檬酸50‑100毫克；(7)将(6)步中生长的生根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭和黄心土体积比为泥炭：黄心土＝1∶1的基质中，浇透水，保持温度28℃左右，相对湿度85％以上，前10天遮光70％，后逐渐见光，15天后生根成活，生根率达96％以上，50天左右，全光照。