[发明专利]一种慢病毒干扰载体的构建及鉴定无效
申请号: | 201310370286.8 | 申请日: | 2013-08-23 |
公开(公告)号: | CN104419731A | 公开(公告)日: | 2015-03-18 |
发明(设计)人: | 施佳萍;杨艳菊 | 申请(专利权)人: | 上海同科生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867;C12N15/66 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 200092 上海市杨浦*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明涉及针对小鼠STAT3基因,构建抑制效率最佳的STAT3shRNA慢病毒干扰载体。针对STAT3基因设计4对shRNA,克隆到慢病毒干扰载体pLenti中,构建出干扰载体PLKO.1-STAT3-shRNA-a1、a2、a3或a4,与包装外壳蛋白质粒 (pVSV-g) 和包膜质粒(Pax-2)共转染293T细胞,上清培养液过滤后到病毒悬液,测定病毒滴度后以一定MOI病毒量感染大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。PLKO.1-STAT3-shRNA-a1、a2、a3或a4经限制性酶切和测序证明基因插入正确,Westernblot法证实PLKO.1-STAT3-shRNA明显降低细胞内STAT3蛋白的表达。 | ||
搜索关键词: | 一种 病毒 干扰 载体 构建 鉴定 | ||
【主权项】:
一种重组慢病毒质粒载体,其特征是该载体含有小鼠的STAT3的基因干扰片段。
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