[发明专利]一种转录激活子样效应因子核酸酶的内源活性检测方法无效
| 申请号： | 201310375783.7 | 申请日： | 2013-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN103468801A | 公开（公告）日： | 2013-12-25 |
| 发明（设计）人： | 唐其柱;卞洲艳;邓伟;周恒;杨政;徐蔓;张洁钰;廖海含 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 张火春 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种转录激活子样效应因子核酸酶的内源活性检测方法。该检测方法包括如下步骤：针对所研究目的基因的外显子序列设计靶位点，构建TALEN质粒对；将TALEN质粒对显微注射至受精卵的原核或将TALEN质粒对体外转录为mRNA显微注射至受精卵胞质内；将注射成功的受精卵体外培养；巢式PCR扩增培养得到的单个胚胎的目的基因；将经琼脂糖凝胶电泳鉴定的PCR产物进行测序，根据测序套峰出现的比例判断TALEN质粒的敲除效率，即可判断TALEN质粒内源活性的高低。本方法直接对目的细胞进行显微注射，能够直接评价TALEN质粒的内源活性；且排除了细胞转染效率的干扰，能够更准确的评价TALEN质粒的活性高低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 转录 激活 效应 因子 核酸酶 内源 活性 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种转录激活子样效应因子核酸酶的内源活性检测方法，其特征在于包括如下步骤：针对所研究目的基因的外显子序列设计靶位点，构建TALEN质粒对；将TALEN质粒对显微注射至受精卵的原核或将TALEN质粒对体外转录为mRNA显微注射至受精卵胞质内；将注射成功的受精卵体外培养；巢式PCR扩增培养得到的单个胚胎的目的基因；将经琼脂糖凝胶电泳鉴定的PCR产物进行测序，根据测序套峰出现的比例判断TALEN质粒的敲除效率，即可判断TALEN质粒内源活性的高低。
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