[发明专利]一种重组人白细胞介素27的制备方法及应用无效
| 申请号： | 201310382501.6 | 申请日： | 2013-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN103409465A | 公开（公告）日： | 2013-11-27 |
| 发明（设计）人： | 邬开朗;胡艳民;曹艳华;张威;吴建国;金晶 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N15/24;C12N7/01;C07K14/54;A61K38/20;A61P31/20 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 张火春 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组人白细胞介素27的制备方法及应用。通过扩增人白细胞介素27的EBI3片段和P28片段，将其克隆到载体pFASTbac-dual上；将所得载体转化大肠杆菌DH10Bac，与其中的Bacmid质粒重组构建重组转座质粒rBacmid，在脂质体介导下将rBacmid转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒；重组杆状病毒感染sf9昆虫细胞；sf9昆虫细胞培养上清先后经过镍亲合层析柱和凝胶层析柱纯化得到重组人白细胞介素27。人白细胞介素27具有抗乙型肝炎病毒感染的作用，可用于制备抗乙型肝炎病毒感染药物。本发明得到的重组人白细胞介素27更接近天然状态，生物活性高；该方法生产成本低产量高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 白细胞 27 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种重组人白细胞介素27的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）克隆人白细胞介素27基因：分别扩增人白细胞介素27的EBI3片段和P28片段，将其克隆到载体pFASTbac‑dual上，得到IL‑27的双表达转移载体pFASTbac‑dual‑IL27； （2）表达重组人白细胞介素27的重组杆状病毒的获得：将上述转移载体pFASTbac‑dual‑IL27转化大肠杆菌DH10Bac，pFASTbac‑dual‑IL27与其中的Bacmid质粒重组构建重组转座质粒rBacmid，在脂质体介导下将rBacmid转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒；（3）在sf9昆虫细胞中表达重组人白细胞介素27：将重组杆状病毒感染sf9昆虫细胞，重组人白细胞介素27在sf9昆虫细胞中得到表达；（4）重组人白细胞介素27的纯化：将上述被重组的杆状病毒感染的sf9昆虫细胞培养3天后离心去掉细胞和细胞碎片收集上清，先后经过镍亲合层析柱和凝胶层析柱纯化得到重组人白细胞介素27。
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