[发明专利]一种金丝楠木组织培养的快繁方法

摘要

本发明涉及一种金丝楠木组织培养的快繁方法，包括以下步骤：（1）选种，预处理、浸泡后放入基质中萌发，待胚分化后转移培养；（2）取幼嫩萌条作为外植体进行芽诱导培养；（3）取新生的幼嫩苗切段进行生根培养；（4）将不定丛芽接种到增殖培养基中进行增殖培养；（5）将增殖培养获得的不定丛芽接种到生根培养基中进行生根培养；（6）炼苗与移栽。本发明采用幼苗茎段组织生根培养，和不定丛芽诱导增殖培养相结合，合理驯化，循环取材，最大程度的保留了金丝楠木的完整基因组，提高了金丝楠木的成活率和品质，加快了金丝楠木的生长速度。

主权项

一种金丝楠木组织培养的快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）选种，预处理、浸泡后放入基质中萌发，待胚分化后转移培养：选择保满、无伤的金丝楠木种子，用800倍多菌灵容液进行预处理，再将种子放入20ppm的生根剂中浸泡30min漏出后，放入珍珠岩基质中，以4cm×4cm的距离安放，然后喷水浇湿，待种子萌发，胚进行分化后有小根生长时，再将种子移到已消毒的苗床中进行培养，得到幼嫩苗和幼嫩萌条；（2）取新生的幼嫩苗切段进行驯化后再进行生根培养：取幼嫩苗，流水冲洗半小时，切成约1.5cm长，带2个节的茎段，0.15%升汞溶液做表面消毒15min，无菌水清洗8次，接种于培养基成分为MS+BA1.0mg/L+白糖2%，pH值5.7±0.1的1/2改良MS的驯化瓶中进行驯化，再放入培养基成分为MS+NAA0.6mg/L的生根培养基上进行生根培养，培养温度为25±1℃，光照强度为2500～3000LX，获得金丝楠木试管苗；（3）取幼嫩萌条作为外植体进行芽诱导培养：用800倍多菌灵溶液对幼嫩萌条进行预处理，预处理3天后将幼嫩萌条放入生根剂溶液中浸泡处理15min，之后冲洗30min，置于操作台上，剪成带1至2个节间的茎段，接着用75%乙醇处理15s，再用0.1% 升汞浸泡处理10min，无菌水清洗8次，接种于培养基成分为MS+BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L的芽驯化瓶中；（4）将不定丛芽接种到增殖培养基中进行增殖培养：待步骤（3）芽驯化瓶中产生不定丛芽后，接种到增殖培养基中，获得更多的不定丛芽；所述增殖培养基以改良MS培养基为基本培养基，所述改良MS培养基的成分中NH4NO3的浓度降为825mg/L；（5）将增殖培养获得的不定丛芽接种到生根培养基中进行生根培养：从步骤（4）中增殖培养获得的不定丛芽中选择生长健壮、株高1.8～2.2cm的芽切割下来，转接到步骤（3）中所述的生根培养基中，按照步骤（3）所述条件进行生根培养，获得金丝楠木试管苗；（6）炼苗与移栽：将步骤（2）、（5）中生根培养基瓶里的金丝楠木苗移栽至炼苗棚内进行炼苗，7d后将其从瓶中小心取出，洗净根部培养基，用0.1%高锰酸钾浸泡处理5min，清洗，沾取25mg/L的ABT生根粉移栽入备好草炭、消毒剂的基质中，移栽后做好棚内苗床温度管理，加盖塑料膜保温，加盖遮阴率80%～90%，每7d喷撒一次800倍杀菌药液，所述杀菌药液为75%多菌灵或25%甲基托布，交替使用。