[发明专利]TRADD基因过表达慢病毒在抑制皮肤疤痕形成中的应用

摘要

本发明公开了TRADD基因过表达慢病毒在抑制皮肤疤痕形成或治疗皮肤疤痕中的应用，并具体公开了TRADD基因过表达慢病毒的制备方法。本发明的TRADD基因过表达慢病毒能同时改善皮肤疤痕的平整度和色泽均匀度。

主权项

TRADD基因过表达慢病毒在抑制皮肤疤痕形成或治疗皮肤疤痕中的应用，其特征在于所述的TRADD基因过表达慢病毒通过如下方法制备而成： (1)TRADD基因为模板，采用PCR法扩增目的片段，扩增引物序列为： TRADD‑F：5’‑CTCAAGCTTCGAATTCGCCACCATGGCAGCTGGGCAA AATG‑3’； TRADD‑R：5’‑CCATGGTGGCGAATTCGGCCAGGCCGCCATTGG‑3’： PCR产物回收纯化后与EcoR I酶切线性化的表达载体pLVX‑EGFP‑3FLAG‑Puro进行重组连接，37℃孵育15min，再50℃孵育15min，立即转化DH5a感受态细胞，最后将已转化的感受态细胞转移至含氨苄青霉素的LB琼脂平板上，37℃培养16h； (2)接种阳性克隆，保种并分装100μl进行测序，测序验证无误后，接种抽提质粒： (3)选择生长状态良好的293FT细胞进行包装：取慢病毒表达载体pLVX‑TRADD‑EGFP‑3FLAG‑Puro3μl、virapower packing mix9μl轻柔混合于1.5ml无血清Opti‑MEM I中，形成溶液A；将36μlLipofectamine2000与1.5ml无血清Opti‑MEM I混合形成溶液B，并室温孵育5min；再将溶液A和B混合，室温孵育20min，形成DNA‑Lipofectamine2000复合物，直接转染293FT细胞，转染48h后，收集病毒液。